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1、浙江大學(xué)化學(xué)工程與生物工程學(xué)系碩士學(xué)位論文普那霉素高產(chǎn)相關(guān)基因的篩選與克隆姓名:洪小偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物化工指導(dǎo)教師:金志華20100101浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractAbstractPristinamycin,amemberofthestreptograminfamilyofantibiotics,isproducedbyStreptomycespristinaespiralisForthepresent,littl
2、eresearchongeneticengineeringofpristinamycinproducingstrainhasbeenconductedoverseasandthereisnoresearchasyetathome,whichblocksthedevelopmentofimprovementofpristinamycinproductionthroughgeneticengineeringInthisarticle,wed
3、idsomeexploratoryresearchongeneticengineeringofpristinamycinproducingstrainFirstly,amplifiedfragmentlengthpolymorpHism(AFLP)techniquewithtwosetsofsinglerestrictionenzymeApaIandSaclIdigestsWasperformedinthisexperiment,and
4、fourpolymorpHicDNAfragmentsonlycouldbedistinguishedfromthegenomesofthehigh—yieldrecombinants,whichWasabsentintheinitialstainATCC25486Aftercloning,sequencingandsimilarityanalysisoftheseDNAfragments,twohomologuesofhighyiel
5、d—relatedgeneswerefoundfortheamplificationtreatmentofApaIselectiveprimersOnewasthehomologueof咖RregulatorygeneandanotherWastransposasegeneTwohomologuesofhighyieldrelatedgeneswerealsoamplifiedwithSaclIselectiveprimersOneWa
6、sthehomologueofa必KregulatorygeneandanotherwasexodeoxyribonucleaseencodedgeneexoSCSecondlyselectingthecosmidsupercos一1asthevectoragenomiccosmidlibraryofpristinamycin—producingstrainofF618WaSsuccessfullyconstructedInthispa
7、rtofexperiment,themethodofextractinggenomicDNAwasimprovedtoobtainthehighmoleculargenomicDNAAlsotheconditionofpartiallydigestingofgenomicDNAwasoptimizedtoobtain35—45kbdigestedfragmentsThroughconnectingpartialfragmentswith
8、vectorpackagingtherecombinantcosmidtobebacteriopHages,andtransductingthebacteriopHagesintoEcoli,ahi曲qualitycosmidgenomiclibraryWassuccessfullyconstructedFinallywiththeDIGlabelledgenefragmentofafskasaprobe,anovelgenewassc
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