木霉菌產(chǎn)生厚垣孢子相關(guān)基因的篩選與克隆.pdf

1、木霉菌是一種具有重要經(jīng)濟價值的絲狀真菌，是一類分布廣泛的土壤習(xí)居菌，被認為是最有希望的生防因子。據(jù)統(tǒng)計，在全世界25個國家和美國43個州的生物防治課題中，大約34％是有關(guān)木霉的研究，可見木霉菌在生物防治上具有獨特優(yōu)勢和研究價值。它的特點是對于生長環(huán)境具有廣泛的適應(yīng)性，可利用各種簡單或復(fù)雜的碳源和氮源，木霉可產(chǎn)生多樣的拮抗作用，產(chǎn)生抗生物質(zhì)和溶菌酶類。目前利用木霉作為植物病害的生防真菌已有很多的報道，但將木霉作為生物農(nóng)藥直接用于生產(chǎn)，菌劑

2、的保質(zhì)期還存在一定的問題。生物制劑要求有一定的保質(zhì)期，而影響菌劑保質(zhì)期的主要因素是菌體類型。木霉制劑有兩種類型，一種利用分生孢子另一種利用厚垣孢子。分生孢子產(chǎn)量大，但存活期短，而厚垣孢子存活時間長，保質(zhì)期長，因此厚垣孢子制劑有其獨特的優(yōu)勢。目前對于厚垣孢子的研究多在于孢子的培養(yǎng)條件，對于厚垣孢子形成的分子機制還知之甚少。為了研究這一問題，我們利用RNA指紋技術(shù)cDNA-AFLP(cDNA-amplifiedfragmentlengthp

3、olymophism)分析了綠色木霉在特異產(chǎn)厚垣孢子的培養(yǎng)基中產(chǎn)生厚垣孢子和不產(chǎn)生厚垣孢子時基因表達的差異。采用了96對引物組合，分離到48個有差異的cDNA片段。通過ReverseNorthernBlot進一步篩選出了五個陽性克隆。NorthernBlot結(jié)果顯示，其中五個片段(TriⅠ、TriⅡ、TriⅢ、TriⅣ、TriⅤ)都呈陽性反應(yīng)，TriⅠ和TriⅡ在不產(chǎn)生厚垣孢子的時候表達量很少，但在產(chǎn)生厚垣孢子時表達量明顯增加。TriⅢ