落葉松抗旱相關(guān)基因分子標(biāo)記的篩選與克隆.pdf

1、落葉松是具有重要經(jīng)濟(jì)和生態(tài)價(jià)值的樹(shù)種，它多分布于寒冷和高山地帶，具有較高的抗旱能力。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)落葉松的研究主要集中在分子系統(tǒng)學(xué)方面。已報(bào)道的基因數(shù)相對(duì)較少，大部分為ribosomal RNA基因序列。因此通過(guò)分子生物學(xué)手段研究落葉松抗旱相關(guān)基因及分子標(biāo)記具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。
　　 本論文主要從兩方面進(jìn)行了研究：
　　 1.落葉松高生根能力相關(guān)基因的分子標(biāo)記研究
　　 本研究以生根率為依據(jù)，分別選取日

2、本落葉松(Larix kaempferi)×長(zhǎng)白落葉松(Larix olgensis)四組雜交組合(日永85×長(zhǎng)白11，日永85×長(zhǎng)混，日永85×長(zhǎng)白4C，日永85×長(zhǎng)白27)為試材，結(jié)合集群分離分析法(BSA)，隨機(jī)引物擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)，特征序列擴(kuò)增區(qū)域(SCAR)技術(shù)及簡(jiǎn)單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增多態(tài)性(ISSR)分子標(biāo)記，首次對(duì)落葉松高生根能力相關(guān)基因分子標(biāo)記進(jìn)行研究。利用368個(gè)RAPD引物，篩選到一個(gè)高生根能力相關(guān)基因

3、的分子標(biāo)記S356445，并成功的將該標(biāo)記轉(zhuǎn)換為SCAR標(biāo)記—HRL445。同時(shí)利用30個(gè)ISSR技術(shù)篩選到4個(gè)新標(biāo)記，分別為：LARI-1，LARI-2，LARI-3，LARl-4。本研究為利用分子標(biāo)記技術(shù)輔助高生根能力落葉松育種，加快育種進(jìn)程提供了新的技術(shù)途徑。
　　 2.落葉松脫水素基因同源序列的克隆
　　 鑒于脫水素在干旱過(guò)程中對(duì)植物起到重要的的保護(hù)作用，本研究采用同源克隆的策略設(shè)計(jì)脫水素基因兼并引物，應(yīng)用PCR