白菜耐鋁基因型的篩選及耐鋁相關(guān)基因克隆.pdf

1、白菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis Makino)屬于十字花科蕓薹屬白菜亞種，品種資源豐富，主要分布在我國(guó)南方地區(qū)，而南方酸性紅壤的鋁毒害卻嚴(yán)重影響了其產(chǎn)量和質(zhì)量。本研究通過開展白菜耐鋁基因的克隆，以期通過基因工程手段獲得白菜耐鋁性新品種。這不僅為蕓薹屬作物的遺傳改良奠定了基礎(chǔ)，而且對(duì)實(shí)現(xiàn)紅壤資源的高效利用具有重要的意義。
　　 本論文以矮腳黃白菜自交系(97-3-2)、黃心烏自交系(0

2、03-27)、上海青自交系(98-4-2)、黃芽菜自交系(97-8-6)、白蔓菁蕪菁自交系(001-24)五個(gè)白菜自交系為材料，篩選白菜最耐鋁基因型和最不耐鋁基因型，采用cDNA-AFLP、Reverse Northernblot、RACE等優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的分子技術(shù)克隆白菜耐鋁基因，研究結(jié)果如下:
　　 (1)對(duì)五種白菜自交系種子進(jìn)行不同程度的鋁脅迫處理，采用根相對(duì)伸長(zhǎng)率測(cè)定法和蘇木精染色法篩選出最耐鋁基因型為矮腳黃，最不耐鋁基因型為

3、黃芽菜。
　　 (2)以矮腳黃自交系和黃芽菜自交系為材料，構(gòu)建不同鋁脅迫時(shí)期的白菜根尖RNA混合池，通過cDNA-AFLP技術(shù)篩選出5個(gè)耐鋁相關(guān)的TDFs，reverse Northernblot驗(yàn)證均呈陽(yáng)性。
　　 (3)4個(gè)TDFs測(cè)序成功:H-A7T12長(zhǎng)485bp，與粳稻群組cDNA克隆同源性100％，編碼的蛋白質(zhì)與粳稻假擬蛋白的相似性100％;A-A8T17長(zhǎng)271bp，與擬南芥煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結(jié)合域蛋白m

4、RNA同源性89％，編碼的蛋白質(zhì)與擬南芥黃素腺嘌呤二核苷酸/煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結(jié)合氧化還原酶相似性85％; A-A19T12長(zhǎng)301bp，與小鹽芥mRNA全長(zhǎng)cds克隆同源性81％，編碼的蛋白質(zhì)與擬南芥抗性蛋白相似性94％。A-A10T8長(zhǎng)300bp，與擬南芥二氫硫辛酰胺S乙?；妻D(zhuǎn)酶基因同源性100％，編碼蛋白與二氫硫辛酰胺S乙酰基移轉(zhuǎn)酶相似性100％，初步判斷其通過調(diào)控細(xì)胞物質(zhì)代謝來(lái)增強(qiáng)白菜耐鋁性。
　　 (4) RACE