膽汁酸經(jīng)典合成途徑的基因調(diào)節(jié)研究.pdf

1、第一部分、高膽固醇攝入對(duì)膽汁酸經(jīng)典合成途徑中基因調(diào)節(jié)的影響
　　 目的：檢測(cè)短期(2天)和較長(zhǎng)期(2周)高膽固醇攝入新西蘭白兔血清膽固醇、膽汁酸水平及肝臟膽汁酸經(jīng)典合成途徑限速酶CYP7A1、核受體FXR和LXR的激活狀態(tài)，揭示短期和較長(zhǎng)期高膽固醇攝入對(duì)膽汁酸合成的不同影響，探討核受體不同的激活狀態(tài)對(duì)膽汁酸合成不同的基因調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　 方法：將36只新西蘭兔隨機(jī)分為4組：2天對(duì)照組、2天膽固醇組、2周對(duì)照組和2周膽固醇

2、組，每組各9只。其中對(duì)照組分別喂飼普通兔糧2天及2周，高膽固醇組分別喂飼含2％膽固醇兔糧2天及2周，喂飼結(jié)束后測(cè)定血清總膽固醇、低密度脂蛋白和膽汁酸水平并測(cè)定肝臟CYP7A1活性及CYP7A1 mRNA、FXR的靶基因SHP mRNA、BSEP mRNA和LXR的靶基因ABCA1 mRNA、CETPmRNA。
　　 結(jié)果：2天對(duì)照組和2周對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)差異(P>0.05)。高膽固醇組的血清總膽固醇、低密度脂蛋白水平均較對(duì)照組升

3、高，且2周高膽固醇組高于2天高膽固醇組(P<0.05)；2天高膽固醇組血清膽汁酸水平與對(duì)照組相比無(wú)變化(P>0.05)，而2周高膽固醇組血清膽汁酸水平較對(duì)照組升高(P<0.05)；2天高膽固醇組肝臟CYP7A1活性及CYP7A1mRNA均較對(duì)照組升高(P<0.05)，而2周高膽固醇組肝臟CYP7A1活性及CYP7A1mRNA均較對(duì)照組降低(P<0.05)；2天高膽固醇組肝臟SHPmRNA、BSEP mRNA與對(duì)照組相比無(wú)變化(P>0.0

4、5)，而2周高膽固醇組肝臟SHPmRNA、BSEP mRNA均較對(duì)照組升高(P<0.05)；高膽固醇組肝臟ABCA1mRNA、CETP mRNA均較對(duì)照組升高，且2周高膽固醇組高于2天高膽固醇組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：高膽固醇攝入使血清總膽固醇、低密度脂蛋白水平升高。短期高膽固醇攝入可激活肝臟LXR受體繼而使CYP7A1活性增加，膽汁酸合成增加；此時(shí)體內(nèi)膽汁酸水平尚未升高故肝臟FXR受體活性不變。當(dāng)較長(zhǎng)期的高膽固醇攝入后

5、，體內(nèi)膽汁酸水平升高從而激活FXR受體；盡管LXR仍被進(jìn)一步激活，但FXR對(duì)CYP7A1的抑制作用強(qiáng)于LXR對(duì)CYP7A1激活作用，CYP7A1活性下降，膽汁酸合成減少。
　　 第二部分、考來(lái)烯胺對(duì)膽汁酸經(jīng)典合成途徑的基因調(diào)節(jié)及其降低血清膽固醇的機(jī)制
　　 目的：研究考來(lái)烯胺對(duì)膽汁酸經(jīng)典合成途徑的基因調(diào)節(jié)及其降低血清膽固醇的作用機(jī)制。
　　 方法：20只新西蘭兔隨機(jī)分為考來(lái)烯胺組和對(duì)照組，每組10只?？紒?lái)烯胺組每

6、天予考來(lái)烯胺混懸液20ml灌胃共2周；對(duì)照組每天予20ml蒸餾水灌胃共2周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后抽血測(cè)定血清總膽固醇、低密度脂蛋白和膽汁酸水平并測(cè)定肝臟CYP7A1活性及CYP7A1 mRNA、SHP mRNA、BSEP mRNA和LDL-R mRNA。
　　 結(jié)果：考來(lái)烯胺組血清總膽固醇水平和低密度脂蛋白水平較對(duì)照組下降(P<0.05)；考來(lái)烯胺組血清膽汁酸水平與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；考來(lái)烯胺組CYP7A1活性及mRN

7、A較對(duì)照組升高(P<0.05)；考來(lái)烯胺組SHPmRNA和BSEP mRNA均較對(duì)照組下降(P<0.05)；考來(lái)烯胺組LDL mRNA較對(duì)照組升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：考來(lái)烯胺使回流入肝的膽汁酸減少，F(xiàn)XR失活從而對(duì)CYP7A1的抑制減弱，CYP7A1活性增高，膽汁酸經(jīng)典途徑合成增加，彌補(bǔ)經(jīng)腸道丟失的膽汁酸并消耗了肝內(nèi)的LDL，肝臟攝取循環(huán)LDL增加，使血清LDL下降。
　　 第三部分、考來(lái)烯胺對(duì)高膽固醇攝入新

8、西蘭兔膽汁酸-膽固醇代謝的影響
　　 目的：研究考來(lái)烯胺對(duì)長(zhǎng)期(4周)高膽固醇攝入新西蘭兔經(jīng)典途徑膽汁酸合成及膽固醇代謝的影響。
　　 方法：將30只新西蘭兔隨機(jī)分為對(duì)照組、高膽固醇血癥模型組和考來(lái)烯胺組，每組10只。對(duì)照組給予普通兔糧，每天予20ml蒸餾水灌胃4周；模型組給予高膽固醇兔糧，每天予20ml蒸餾水灌胃4周；考來(lái)烯胺組給予高膽固醇兔糧，每天予考來(lái)烯胺混懸液20ml灌胃4周。4周后抽血測(cè)定血清總膽固醇、低密度脂

9、蛋白、膽汁酸水平并測(cè)定肝臟HMGCoA還原酶活性、CYP7A1活性及CYP7A1mRNA、SHP mRNA、BSEP mRNA和LDL-R mRNA。
　　 結(jié)果：模型組、考來(lái)烯胺組血清總膽固醇及低密度脂蛋白均較對(duì)照組上升(P<0.01)；考來(lái)烯胺組血清總膽固醇及低密度脂蛋白均較模型組下降(P<0.01)。模型組、考來(lái)烯胺組血清膽汁酸水平較對(duì)照組上升(P<0.01)，模型組和考來(lái)烯胺組血清膽汁酸水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01

10、)。模型組CYP7A1活性及mRNA較對(duì)照組降低(P<0.01)；考來(lái)烯胺組CYP7A1活性及mRNA組較模型組升高(P<0.01)。模型組HMGCoA還原酶活性較對(duì)照組降低(P<0.01)；考來(lái)烯胺組HMGCoA還原酶活性較模型組升高(P<0.01)但與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組肝臟SHP mRNA和BSEP mRNA均較對(duì)照組升高(P<0.01)；考來(lái)烯胺組肝臟SHP mRNA和BSEP mRNA均較對(duì)照組升高(

11、P<0.01)且較模型組下降(P<0.01)。模型組LDL mRNA較對(duì)照組下降(P<0.01)；考來(lái)烯胺組LDL mRNA較對(duì)照組和模型組升高(P<0.01)。
　　 結(jié)論：長(zhǎng)期高膽固醇攝入新西蘭兔肝臟FXR被激活，CYP7A1活性及其mRNA、HMGCoA還原酶活性、LDL mRNA下降，血清膽固醇、低密度脂蛋白和膽汁酸升高；同時(shí)應(yīng)用考來(lái)烯胺可降低FXR活性，CYP7A1活性及其mRNA、HMGCoA還原酶活性、LDL mR