膽汁酸通路介導(dǎo)的絞股藍(lán)總皂苷調(diào)節(jié)糖脂代謝的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：利用飲食誘導(dǎo)的高血糖、高血脂小鼠模型，考察絞股藍(lán)總皂苷對糖脂代謝紊亂的藥效，并進(jìn)一步考察與糖脂代謝密切相關(guān)的膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn)通路在其中的作用。闡述絞股藍(lán)總皂苷調(diào)控糖脂代謝的作用機(jī)制，為絞股藍(lán)總皂苷及其中的主要皂苷成分后期的制劑開發(fā)明確靶點(diǎn)。
　　方法：⑴動物模型建立：雄性C57BL/6J小鼠，自由攝取高脂高糖食物（脂肪：60％；糖：20%；蛋白質(zhì)20%）16周，以體重、血清總膽固醇、血糖水平、血清低密度脂蛋白水平等定量指標(biāo)的變

2、化，結(jié)合組織病理學(xué)的定性觀察指標(biāo)，判斷造模終點(diǎn)。⑵絞股藍(lán)總皂苷調(diào)控糖脂代謝的藥效學(xué)及安全性研究：造模成功后，治療組小鼠每日（qd）口服給予絞股藍(lán)總皂苷（250 mg/Kg）2、4、10、16、22周。用HE染色法檢查肝臟組織病理學(xué)變化。羅格列酮（降血糖藥，1.2 mg/Kg，qd）、辛伐他?。ń的懝檀妓?，20 mg/Kg，qd）、非諾貝特（降甘油三酯藥，35 mg/Kg， qd）分別用作陽性對照。陰性對照組小鼠給予與絞股藍(lán)總皂苷給藥量等

3、體積的羧甲基纖維素鈉溶液（qd）。以上各組小鼠均持續(xù)給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)。另取一組小鼠給予普通飼料喂養(yǎng)以監(jiān)測小鼠生理學(xué)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。以體重、血清總膽固醇水平、血糖水平、血清低密度脂蛋白水平等為定量指標(biāo)，以組織病理學(xué)變化為定性指標(biāo)，考察絞股藍(lán)總皂苷調(diào)控糖脂代謝的藥效。同時(shí)，監(jiān)測血清轉(zhuǎn)氨酶水平、各種臟器指數(shù)以考察絞股藍(lán)皂苷長期給藥的安全性。⑶膽汁酸通路相關(guān)因子的基因表達(dá)變化研究：提取分離藥效學(xué)研究中各組小鼠的肝臟及十二指腸mRNA?？疾?1種與

4、膽汁酸合成、轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控直接相關(guān)的肝臟基因表達(dá)的變化，以明確絞股藍(lán)調(diào)控糖脂代謝的藥效是否與 FXR介導(dǎo)的膽汁酸通路有一定關(guān)系。由于FXR→Fgf15通路是腸道特有的調(diào)控通路，F(xiàn)XR和Fgf15的腸道表達(dá)也納入研究。⑷絞股藍(lán)總皂苷對膽汁酸分子的調(diào)控作用研究：除膽汁酸合成與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)變化外，本研究還針對膽汁酸分子進(jìn)行直接測定。本部分通過 LC-MS/MS分析藥效學(xué)研究中各組肝臟中14種主要膽汁酸分子的變化規(guī)律，以和mRNA的變化以及藥效

5、學(xué)指標(biāo)的變化進(jìn)行相關(guān)性分析，共同闡述絞股藍(lán)總皂苷的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：①高血脂高血糖小鼠模型成功建立：小鼠自由攝取模型飼料16周后，其體重（P<0.01）、血脂水平（P<0.01）、血糖（P<0.05）水平均顯著升高，其血脂主要特點(diǎn)為血清總膽固醇與低密度脂蛋白膽固醇同時(shí)升高，并且還觀察到高脂飲食組小鼠產(chǎn)生糖耐量受損和胰島素抵抗。組織病理學(xué)檢查顯示小鼠肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴。②絞股藍(lán)總皂苷調(diào)控血脂血糖水平藥效明確：絞股藍(lán)皂苷給藥10

6、周后，觀察到血糖發(fā)生顯著下降（P<0.05）；繼續(xù)給藥至16周觀察到血清總膽固醇水平、低密度脂蛋白膽固醇水平均顯著下降（P<0.01）。給藥2周組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)皂苷能減少肝細(xì)胞中的脂滴大小和數(shù)量。給藥22周觀察到肝系數(shù)（P<0.05）和血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量顯著下降（P<0.05）。③絞股藍(lán)總皂苷調(diào)控糖脂代謝的作用機(jī)制：以膽汁酸合成及調(diào)控通路上的關(guān)鍵因子為研究對象，本論文分別在基因表達(dá)水平和膽汁酸分子水平進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，膽

7、汁酸合成的關(guān)鍵酶CYP8B1和CYP7A1在高脂食物壓力下均顯著下調(diào)，而絞股藍(lán)總皂苷的給藥有效的逆轉(zhuǎn)了這一異常趨勢。與之對應(yīng)的，CYP7A1和 CYP8B1與他們的上游負(fù)調(diào)控子的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系。在膽汁酸水平，總膽汁酸，尤其是結(jié)合型膽汁酸的分泌在絞股藍(lán)總皂苷組顯著上調(diào)，與基因表達(dá)數(shù)據(jù)一致。此外，在整個(gè)通路的宏觀水平，通過對基因表達(dá)及膽汁酸水平的主成分分析以及熱圖可視化，清晰地表明，絞股藍(lán)總皂苷顯著的影響了膽汁酸合成代謝通路。最關(guān)