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文檔簡介
1、三七是我國常用的傳統(tǒng)中藥,為五加科(Araliaceae)人參屬三七[Panax notoginseng(Burk.) F.H.Chen]的干燥塊根,味甘,微苦,性溫,歸肝、胃經(jīng),主產(chǎn)于云南、廣西及四川等地,具有止血化瘀、活血定痛等功效。三七總皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)是三七的主要活性部位,長期應(yīng)用于心血管疾病的防治中,并有顯著效果,其藥理作用已被廣泛深入的研究,本室既往研究表明,PNS可以有效
2、防治動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)的發(fā)生發(fā)展。 PNS作為中藥三七的有效部位,其成分非常復(fù)雜,開發(fā)利用PNS組份中的單體成分及對(duì)其活性代謝單體的研究已成為近年來中藥現(xiàn)代化研究的熱點(diǎn)。在對(duì)其單體組份的研究中發(fā)現(xiàn),單體組份及其配伍只能部分的反應(yīng)出PNS的藥理作用。另外,某些既往被認(rèn)為有重要作用的單體口服后并不能以原型進(jìn)入血液循環(huán)發(fā)揮其藥理作用,如Paek1B等發(fā)現(xiàn),口服Rbl后血液中未檢測出Rbl,只測出其代
3、謝終產(chǎn)物;KanaokaM等應(yīng)用EIA-HPLC技術(shù)對(duì)58例1-64歲健康志愿者血液中的藥物成分進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn),口服紅參后血液中未檢測出傳統(tǒng)被認(rèn)為有活性作用的Rbl; AkaoT等也發(fā)現(xiàn),給腸道無微生物小鼠口服Rbl后,血液中未檢測出Rbl及其代謝產(chǎn)物。上述研究表明,口服PNS或Rbl后,Rbl本身難以通過胃腸道吸收入血,而是經(jīng)過腸道內(nèi)微生物代謝后方被吸收,繼之產(chǎn)生抗AS等藥理作用。為此,本室與企業(yè)合作,利用模擬生物體腸道微生態(tài)環(huán)境反應(yīng)技
4、術(shù)制備出了三七總皂苷活性代謝單體NG701和NG801。NG701是二醇型皂苷Rbl在人腸道內(nèi)的代謝產(chǎn)物,NG801是三醇型皂苷Rgl在人腸道內(nèi)的代謝產(chǎn)物,目前對(duì)他們?cè)诳笰S方面作用的研究未見報(bào)道。 AS是多種心血管疾病的共同病理基礎(chǔ),嚴(yán)重威脅著人類的健康。研究表明,巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞形成是AS形成的啟動(dòng)因素,對(duì)病變形成后的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸有重要作用。 為此,本研究通過體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞,觀察NG701、NG80
5、1對(duì)泡沫細(xì)胞形成情況的影響,并以ABCA1、LXRa、HMG-CoA還原酶、CD36 mRNA在泡沫細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)為指標(biāo)對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了初步的探討。 方法: 1.體外培養(yǎng)大鼠巨噬細(xì)胞,將各劑量NG701(3、10、30μmol/L),NG801、Rbl、Rgl(3、10、30、100μmol/L)及氧化低密度脂蛋白與巨噬細(xì)胞共孵育24h。油紅“O”染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積情況。 2.酶法測定細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TC)的含量
6、。 3.采用real time-PCR法檢測泡沫細(xì)胞內(nèi)ABCA1、LXRα、HMG-CoA還原酶、CD36mRNA表達(dá)情況。 結(jié)果: 1.光鏡下觀察發(fā)現(xiàn),對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)多呈圓形及梭形,油紅“O”染色無著色;模型組油紅“O”染色陽性細(xì)胞遍布,且細(xì)胞體積明顯增大,形態(tài)多呈圓形;NG701給藥濃度為10、30μmol/L時(shí),細(xì)胞內(nèi)紅染的圓形顆粒比模型組明顯減少,且細(xì)胞形態(tài)漸趨正常。 2.NG801給藥濃度為30
7、、100μmol/L時(shí),細(xì)胞內(nèi)紅染的圓形顆粒比模型組明顯減少,且細(xì)胞形態(tài)漸趨正常。 3.模型組細(xì)胞內(nèi)TC水平顯著高于對(duì)照組(P<0.01);與模型組相比,細(xì)胞內(nèi)總膽固醇含量與NG701的給藥濃度呈劑量依賴性的降低,NG701在濃度為10μmol/L時(shí)即能顯著的降低泡沫細(xì)胞內(nèi)TC水平。 4.NG801在濃度為30μmol/L時(shí)細(xì)胞內(nèi)TC水平比模型組明顯降低(P<0.05);在100μmol/L時(shí)細(xì)胞內(nèi)TC水平比模型組顯著降
8、低(P<0.01)。 5.與模型組相比,NG701組在濃度為3μmol/L時(shí),對(duì)細(xì)胞內(nèi)CD36、LXRa、ABCA1、HMG-CoA還原酶mRNA的表達(dá)無影響;10μmol/L時(shí),可下調(diào)CD36 mRNA(P<0.01)、HMG-CoA還原酶(P<0.01)mRNA的表達(dá),上調(diào)LXRa mRNA(P<0.05)、ABCA1mRNA(P<0.01)的表達(dá);30μmol/L時(shí),可下調(diào)CD36 mRNA(P<0.01)、HMG-CoA
9、還原酶(P<0.01)mRNA的表達(dá),上調(diào)LXRa mRNA(P<0.01)、ABCAI mRNA(P<0.01)的表達(dá)。 6.與模型組相比,NG801組在濃度為3、10μmol/L時(shí),對(duì)細(xì)胞內(nèi)CD36、LXRα、ABCA1、HMG-CoA還原酶mRNA的表達(dá)無影響;30μmol/L時(shí),可下調(diào)CD36mRNA(P<0.01),上調(diào)LXRa mRNA(P<0.05)、ABCAI mRNA(P<0.01)的表達(dá),對(duì)HMG-CoA還原
10、酶mRNA的表達(dá)無影響;100μmol/L時(shí).可下調(diào)CD36 mRNA(P<0.01)、HMG-CoA還原酶(P<0.01)mRNA的表達(dá),上調(diào)LXRa mRNA(P<0.01)、ABCAImRNA(P<0.01)的表達(dá)。 結(jié)論: 1.NG701、NG801能劑量依賴性的減少巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞內(nèi)總膽固醇的含量,經(jīng)NG701、NG801處理后的泡沫細(xì)胞,其細(xì)胞內(nèi)紅染物質(zhì)減少,細(xì)胞形態(tài)漸趨正常。且NG701、NG801活性
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