ABCB4基因介導(dǎo)胎盤膽汁酸排泌機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究背景妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是一種發(fā)生在妊娠中、晚期的特發(fā)性疾病。ICP雖然對母體無嚴(yán)重危害,但對胎兒影響較大,是引起胎兒窘迫、早產(chǎn)、羊水糞染、死胎、死產(chǎn)的主要原因之一[1-2]。該病因及發(fā)病機(jī)制尚未明了,臨床和流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),它主要與激素、遺傳因素及環(huán)境因素有關(guān)。ICP的發(fā)生具有明顯的家族性、種族性及地域性。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并明確

2、了在肝臟存在著膽淤相關(guān)基因:ABCB4(MDR3)、ABCB11(BSEP)和ATP8B1(FIC1)基因,分別編碼毛細(xì)膽管上磷脂載體、膽汁酸輸出泵以及氨基磷脂載體[3]。以上三種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白均參與了肝臟膽汁酸的轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌過程。膽淤相關(guān)基因的突變、異常表達(dá)可分別引起多種遺傳性肝內(nèi)膽汁淤積癥。但關(guān)于這三種膽淤相關(guān)基因在人類胎盤上轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的表達(dá)情況,人們知之甚少,是否也參與了胎盤膽汁酸的排泌?是否與ICP圍生兒預(yù)后有關(guān)?值得我們研究。

3、
　　 目的檢測正常晚孕和ICP患者母胎血中甘膽酸和母體轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素的變化,探討膽汁酸變化與圍生兒預(yù)后不良的關(guān)系:檢測膽淤相關(guān)基因之一ABCB4(MDR3)基因在正常晚孕和ICP患者胎盤組織中的表達(dá)及其差異；檢測ABCB4(MDR3)基因與膽汁酸的相關(guān)性；檢測MDR3P-gp在胎盤組織中的細(xì)胞學(xué)定位,及其在正常晚孕和ICP患者胎盤組織中的表達(dá)差異,從而探討ABCB4基因與ICP胎盤膽汁酸排泌功能下降的關(guān)系。
　　 方法

4、：收集妊娠晚期ICP患者(ICP組)和正常晚孕婦女(對照組)各30例,分別采集母體靜脈血和新生兒臍靜脈血及胎盤組織,采用化學(xué)氧化法和酶動力學(xué)法檢測母血膽紅素及轉(zhuǎn)氨酶,采用放射免疫分析方法檢測母血及臍血中的甘膽酸(CG)含量；采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR)測定兩組胎盤組織中ABCB4mRNA的相對表達(dá)量；采用免疫組織化學(xué)方法檢測ABCB4(MDR3)蛋白(MDR3P-gp)在胎盤組織中的細(xì)胞學(xué)定位及兩組胎盤組織中MDR3P-g

5、p的表達(dá),探討胎盤MDR3基因與胎盤膽汁酸排泌的關(guān)系。
　　 結(jié)果：(1)ICP組母血中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素均高于對照組(159.32±71.17vs25.16±12.70u/L;21.57±6.36vs5.11±2.74mmol/L)；以上差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。(2)ICP組母血、臍血中CG水平均高于對照組(28.86±8.51vs2.70±2.19；19.97±8.80vs5.83±5.06μg/ml),以

6、上差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)；ICP組母血CG含量高于臍血中的含量,兩者之間存在正相關(guān)(r=0.588)；對照組臍血CG含量高于母血中的含量,兩者之間無直線關(guān)系(r=0.212);(3)兩組胎盤組織中均檢測到ABCB4(MDR3)基因的mRNA,與對照組相比,ICP組胎盤組織中ABCB4(MDR3)基因的mRNA水平下降(3.33±1.03vs6.85±1.26),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)；且MDR3-mRNA相對量