豬β-防御素2多克隆和單克隆抗體的制備及應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、抗菌肽是由動物機體自身分泌的抵抗外界病原微生物的一類微量的重要蛋白質,它在動物的先天免疫中發(fā)揮十分重要的作用。因其獨特的抗菌機制、廣泛的抗菌譜以及不易產生耐藥性等特點,近年來成為研究的熱門。防御素是其中一類重要的小分子陽離子抗菌肽。目前有不少研究者試圖通過轉基因動物大量表達防御素,以增強轉基因動物的抗病能力。為了建立檢測豬β-防御素2(PBD2)在豬和轉基因動物中的表達,本研究制備了PBD2的多克隆抗體和單克隆抗體,建立了間接免疫熒光和

2、免疫組織化學檢測方法。
   本研究根據(jù)PBD2的氨基酸序列,人工合成了PBD2的11肽,與鑰匙孔血藍蛋白KLH偶聯(lián)成全抗原PBD2-KLH,免疫Balb/C小鼠,三次免疫后,以合成的37肽作為PBD2抗體的檢測抗原,檢測小鼠血清效價,均達到1:12800以上,取其血清制備小鼠抗PBD2的多克隆抗體,并利用該鼠源PBD2多抗建立了PBD2的間接免疫熒光檢測方法。
   通過間接ELISA方法篩選出抗體水平高的小鼠,取其脾

3、細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合,用間接ELISA方法篩選出陽性克隆,用有限稀釋法進行兩次亞克隆,最后獲得5株雜交瘤細胞株1C2、1F4、2H2、3A2和481,均能夠穩(wěn)定分泌特異性好、效價高的PBD2單克隆抗體,其細胞培養(yǎng)上清的抗體ELISA效價達到1:210以上,腹水的抗體的ELISA效價達到l:106以上。
   分別取臨床健康豬和胸膜肺炎放線桿菌血清1型4074株感染豬的肝臟、脾臟、腸系膜淋巴結、小腸等組織,用制備的單克隆

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