豬β-防御素2多克隆和單克隆抗體的制備及應用.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩57頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、抗菌肽是由動物機體自身分泌的抵抗外界病原微生物的一類微量的重要蛋白質,它在動物的先天免疫中發(fā)揮十分重要的作用。因其獨特的抗菌機制、廣泛的抗菌譜以及不易產生耐藥性等特點,近年來成為研究的熱門。防御素是其中一類重要的小分子陽離子抗菌肽。目前有不少研究者試圖通過轉基因動物大量表達防御素,以增強轉基因動物的抗病能力。為了建立檢測豬β-防御素2(PBD2)在豬和轉基因動物中的表達,本研究制備了PBD2的多克隆抗體和單克隆抗體,建立了間接免疫熒光和

2、免疫組織化學檢測方法。
　　 本研究根據(jù)PBD2的氨基酸序列,人工合成了PBD2的11肽,與鑰匙孔血藍蛋白KLH偶聯(lián)成全抗原PBD2-KLH,免疫Balb/C小鼠,三次免疫后,以合成的37肽作為PBD2抗體的檢測抗原,檢測小鼠血清效價,均達到1:12800以上,取其血清制備小鼠抗PBD2的多克隆抗體,并利用該鼠源PBD2多抗建立了PBD2的間接免疫熒光檢測方法。
　　 通過間接ELISA方法篩選出抗體水平高的小鼠,取其脾

3、細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合,用間接ELISA方法篩選出陽性克隆,用有限稀釋法進行兩次亞克隆,最后獲得5株雜交瘤細胞株1C2、1F4、2H2、3A2和481,均能夠穩(wěn)定分泌特異性好、效價高的PBD2單克隆抗體,其細胞培養(yǎng)上清的抗體ELISA效價達到1:210以上,腹水的抗體的ELISA效價達到l:106以上。
　　 分別取臨床健康豬和胸膜肺炎放線桿菌血清1型4074株感染豬的肝臟、脾臟、腸系膜淋巴結、小腸等組織,用制備的單克隆

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論