魚藤素聯(lián)用L-肌肽的增效減毒作用研究.pdf

1、魚藤素是一種天然的魚藤酮類化合物，其抗瘤譜廣泛，對肺癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、頭頸癌等多種腫瘤具有良好的抗腫瘤效應(yīng)。目前魚藤素的應(yīng)用受限于其帕金森樣神經(jīng)毒性，然而目前針對魚藤素神經(jīng)毒性的研究較少，因此，對魚藤素的神經(jīng)毒性進(jìn)行研究，尋找合適的降低魚藤素神經(jīng)毒性的方法尤為迫切。L-肌肽是一種內(nèi)源性二肽，其抗氧化作用和抑制α-突觸核蛋白(α-synuclein，α-SYN)聚集的作用能有效保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞，對延緩帕金森病(Parki

2、nson's disease，PD)進(jìn)程具有重要意義。近年來多項體內(nèi)外研究報道L-肌肽具有抗腫瘤作用，因此，聯(lián)合應(yīng)用L-肌肽和魚藤素，可能起到協(xié)同抗腫瘤作用以及降低魚藤素神經(jīng)毒性的作用。
　　本文的研究內(nèi)容如下:
　　(1)CCK-8法測定魚藤素對SH-SY5Y細(xì)胞的增殖的抑制作用;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測處理后各組細(xì)胞內(nèi)的凋亡率和活性氧(Reactive oxygen species，ROS)水平，驗證魚藤素是否通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)

3、細(xì)胞凋亡;采用分光光度法測定caspase-3活化程度，進(jìn)一步驗證魚藤素對SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。
　　(2)檢測不同濃度L-肌肽對SH-SY5Y細(xì)胞增殖的影響;選取合適濃度的L-肌肽，CCK-8法測定L-肌肽和魚藤素共同處理對SH-SY5Y細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測L-肌肽和魚藤素共同處理對SH-SY5Y細(xì)胞凋亡和ROS水平的影響，驗證L-肌肽是否通過其抗氧化活性發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　(3)采用Wester

4、n-blot/Q-PCR法在分子水平上（蛋白/mRNA水平）檢測L-肌肽和魚藤素作用后對SH-SY5Y細(xì)胞的目的基因α-SYN、parkin表達(dá)量的影響。
　　(4)選取H1299細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞模型，采用Chou-Talary法評價L-肌肽和魚藤素聯(lián)合用藥的抗腫瘤活性。
　　本文結(jié)果如下:
　　(1)魚藤素呈濃度依賴性抑制SH-SY5Y細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與氧化應(yīng)激有關(guān)。
　　(2)L-肌肽對魚藤素

5、誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡和抑制增殖具有一定程度的保護(hù)作用;L-肌肽共處理組細(xì)胞的ROS水平顯著降低，提示L-肌肽可能通過其抗氧化活性發(fā)揮保護(hù)作用。
　　(3)魚藤素可能不是通過上調(diào)α-SYN誘導(dǎo)帕金森樣神經(jīng)毒性，其神經(jīng)毒性可能與下調(diào)parkin基因表達(dá)相關(guān)。L-肌肽可能通過減輕魚藤素對parkin基因的抑制作用，從而保留了parkin蛋白的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　(4)魚藤素和L-肌肽聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同抑制H1299細(xì)胞增殖效應(yīng)，且在本