Blimp--1通過介導PD--1-PD--L1途徑對自身免疫性甲狀腺炎導致流產(chǎn)的作用及影響.pdf

1、多項研究表明，母體甲功正常的自身免疫性甲狀腺炎(AIT)與流產(chǎn)相關，然而具體機制尚未闡明。AIT的疾病特征為淋巴細胞浸潤甲狀腺內(nèi)部和甲狀腺產(chǎn)生自身抗體。甲狀腺過氧化物酶抗體(thyroid-peroxidase antibody，TPOAb)和甲狀腺球蛋白抗體(thyroglobulin antibody，TgAb)是重要的標志性抗體。一項大型甲狀腺疾病狀況調(diào)查發(fā)現(xiàn)TPOAb陽性的育齡婦女人數(shù)較多，約占12.9％，陽性者病理性妊娠發(fā)病率

2、為8.6％。母體甲功正常的自身免疫性甲狀腺炎所導致的最為常見也是最為嚴重的不良妊娠結(jié)局是流產(chǎn)和復發(fā)性流產(chǎn)。
　　調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory T cells，Treg)在自身免疫疾病導致流產(chǎn)的過程中有著舉足輕重的地位。已經(jīng)證實，程序性細胞死亡分子-1(programmed cell death-1，PD-1)/程序性死亡配體-1(programmed cell death Gilligan，PD-L1)共刺激途徑的增強或者阻

3、斷直接與自身免疫病致流產(chǎn)相關。而該通路對Treg的作用主要是通過抑制蛋白激酶B/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)信號傳導來實現(xiàn)的。PD-1/PD-L1負性共刺激信號能夠使下游mTOR表達下調(diào)，進一步調(diào)控T細胞的分化、增殖、代謝和生存。B淋巴細胞誘導成熟蛋白1(Blimp-1)在自身免疫性疾病導致的流產(chǎn)中也起重要作用。Blimp-1作為轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)T細胞和B細胞終末分化的過程中起到抑制性作用，它通過直接結(jié)合PD-1啟動子以及抑

4、制活化T細胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells，cytoplasmic1，NFATc1)表達，從而抑制PD-1。
　　胚胎對于母體屬于一種異物，妊娠過程其實是母體對胚胎這一抗原進行妥協(xié)促使自身發(fā)生免疫耐受，這種母胎耐受包含母胎界面發(fā)生的免疫耐受和外周界面發(fā)生的免疫耐受。免疫耐受過程對胎兒的成長發(fā)育至關重要，如果在過程中任何一種免疫耐受發(fā)生失衡，母體對胎兒則會表現(xiàn)出免疫排斥，產(chǎn)生抗體攻擊

5、胎兒，導致流產(chǎn)的發(fā)生。但在自身免疫性甲狀腺炎導致的流產(chǎn)中Blimp-1，PD-1/PD-L1，mTOR以及Treg之間有何種相互作用及影響，少見報道。
　　目的:
　　本研究旨在探討在AIT所致流產(chǎn)中Blimp-1對PD-1/PD-L1的影響以及對下游mTOR，Treg的作用。
　　方法:
　　(1)AIT動物模型構(gòu)建:以小鼠甲狀腺球蛋白(mTg)皮下注射CBA/J雌鼠體內(nèi)，動物狀態(tài)平穩(wěn)后與Balb/c雄鼠合籠構(gòu)

6、建自身免疫性甲狀腺炎孕鼠流產(chǎn)模型。(2)留取血清，取完整甲狀腺、胎盤、脾。(3)應用免疫組織化學法與免疫組織熒光法檢測胎盤與脾臟Blimp-1、PD-1/PD-L1、mTOR及Treg代表性分子Foxp3蛋白的表達。(4)應用Western blot（免疫蛋白印跡法）檢測胎盤與脾臟Blimp-1;PD-1/PD-L1;mTOR及Foxp3的表達水平。(5)分析在胎盤與脾臟中Blimp-1、PD-1/PD-L1與mTOR以及Treg變化水

7、平相關性。
　　結(jié)果:
　　(1)與con組相比較，Tg組雌鼠血清中TgAb較高(P＜0.05);甲狀腺HE顯示有甲狀腺內(nèi)有大量淋巴細胞浸潤，濾泡細胞被破壞，模型構(gòu)建成功。
　　(2)免疫組化結(jié)果顯示，與con組相比mTg組Blimp-1、mTOR在胎盤的表達量增加;PD-1、PD-L1表達降低;免疫熒光結(jié)果表明mTg組Foxp3的表達也顯著低于con組。
　　(3)Western blot結(jié)果顯示，Blimp-

8、1、mTOR在胎盤表達量顯著高于con組(P＜0.05);與con組相比，mTg組PD-1、PD-L1以及Foxp3均降低(P＜0.05)。
　　(4)脾臟IHC-P（免疫組化）顯示，mTg組Blimp-1和mTOR在胎盤的表達量增加而PD-1、PD-L1、Foxp3顯著降低。
　　(5)脾臟Western blot結(jié)果稍有差異，與con組相比mTg組Blimp-1顯著增加(P＜0.05);PD-1、PD-L1以及Foxp3

9、顯著降低(P＜0.05);而mTg組mTOR與con組對比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)200μg小鼠Tg蛋白(mTg)免疫CBA/J雌鼠可成功構(gòu)建單純TgAb陽性的AIT流產(chǎn)動物模型:在妊娠期間會出現(xiàn)淋巴細胞浸潤，甲狀腺濾泡細胞破壞，并且實驗組小鼠胚胎吸收率明顯增加，胚胎發(fā)育異常且小鼠Tg蛋白(mTg)免疫后實驗組小鼠體內(nèi)出現(xiàn)較高Tg抗體滴度;(2)TgAb陽性孕鼠Blimp-1的異常增多可能