Fgl2過(guò)表達(dá)下調(diào)PD-1的表達(dá)對(duì)自身免疫性心肌炎大鼠心功能的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诮⒋笫笞陨砻庖咝孕募⊙啄Ｐ?，通過(guò)對(duì)免疫負(fù)性調(diào)控信號(hào)分子PD-1在自身免疫性心肌炎大鼠心肌中的表達(dá)情況的檢測(cè)，分析其在自身免疫性心肌炎病程發(fā)展中的意義，并以慢病毒介導(dǎo)Fgl2基因過(guò)表達(dá)進(jìn)行干預(yù)，探討Fgl2作為治療自身免疫性心肌炎心肌免疫性損傷的干預(yù)靶點(diǎn)的可行性及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　選擇購(gòu)買(mǎi)SPF級(jí)雄性6-7周齡Lewis大鼠32只，隨機(jī)選取8只為正常對(duì)照組（NC組），余24只為實(shí)驗(yàn)

2、組：以純化的豬心肌肌球蛋白（PCM）皮下注射法建立大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎模型。實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分為3組，每組8只，即實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎組（EAM組）、Fgl2慢病毒過(guò)表達(dá)自身免疫性心肌炎組（EAM-Fgl2組）、空載體組（EAM-GFP組）。EAM-Fgl2組與EAM-GFP組大鼠于造模第1天，分別經(jīng)大鼠尾靜脈注射包裝好的Fgl2過(guò)表達(dá)慢病毒載體和等量的GFP慢病毒載體（5x107TU/只）。第40天，對(duì)各組大鼠行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)，分別

3、測(cè)定LVEDd、LVEDs、LVEF、LVFS等指標(biāo)。完成超聲檢測(cè)后，摘除眼球取血提取血清，用于ELISA檢測(cè)IL-17、IL-6、INF-γ炎性因子及BNP水平。處死大鼠后摘除心臟，一部分用于HE染色觀察心肌炎性程度，另一部分用于提取蛋白，Western blot檢測(cè)Fgl2、PD-1、Foxp3、RORγt蛋白表達(dá)，提取心肌組織mRNA，RT-PCR檢測(cè)Fgl2、PD-1、Foxp3、RORγt的mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果

4、：
　?。?）實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)明顯的心功能不全的表現(xiàn)：免疫40天后，實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)弓背，呼吸頻率增快，進(jìn)食量、進(jìn)水量、活動(dòng)量均明顯減少，體重減輕。
　?。?）心功能改變情況：超聲心動(dòng)圖檢測(cè)示，實(shí)驗(yàn)組大鼠心臟明顯擴(kuò)大，HR、LVEF、LVFS較NC組降低，其中EAM-Fgl2組降低更明顯（P>0.05），提示Fgl2過(guò)表達(dá)加重心功能惡化程度。
　?。?）心肌病理切片HE染色觀察心肌損傷程度：正常組心肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯改

5、變；實(shí)驗(yàn)組可見(jiàn)心肌細(xì)胞肥大，肌纖維排列紊亂，間質(zhì)水腫；EAM-Fgl2組表現(xiàn)為心肌細(xì)胞變性、壞死，間質(zhì)纖維化，可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。Rezkalla法計(jì)算心肌炎性積分， EAM-Fgl2組較 EAM組炎性積分增高（P>0.05）。
　?。?）血清ELISA檢測(cè)相關(guān)炎癥因子及BNP水平：與NC組比較，實(shí)驗(yàn)組大鼠血清中BNP、IL17、IL-6的表達(dá)水平增高（P<0.05），其中EAM-Fgl2組與EAM組相比，BNP、IL

6、-6及IL17明顯升高（P<0.05），EAM組與 EAM-GFP組無(wú)差異。
　　（5）RT-PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果示：實(shí)驗(yàn)組Fgl2、RORγt、Foxp3的mRNA及蛋白表達(dá)量均較NC組增高（P<0.05），PD-1的mRNA及蛋白的表達(dá)量較NC組降低，EAM-Fgl2組Fgl2過(guò)表達(dá)使Fgl2的mRNA及蛋白表達(dá)量明顯增高，PD-1的mRNA蛋白表達(dá)量則較EAM組進(jìn)一步降低（P<0.05）。
　　結(jié)論