非諾貝特改善大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎及其對(duì)Th17細(xì)胞相關(guān)因子的作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:心血管疾病(cardiovascular disease)是引起社會(huì)整體發(fā)病率和死亡率居高不下的主要病因。心肌炎(Myocarditis)是一種異質(zhì)性的心肌炎癥疾病，多數(shù)心肌炎患者可發(fā)展為以進(jìn)行性心衰為主要特征的擴(kuò)張型心肌病(Dilated Cardiomyopathy，DCM)，預(yù)后較差。因此對(duì)心肌炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程的研究，并利用其特點(diǎn)進(jìn)行針對(duì)性治療顯得尤為重要。目前為止，心肌炎的發(fā)病機(jī)制尚不明確，有研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫反應(yīng)在心肌

2、炎及DCM的發(fā)生發(fā)展中扮演極其重要的角色。本實(shí)驗(yàn)以自身免疫性心肌炎為基礎(chǔ)展開(kāi)研究。
　　 在經(jīng)典的輔助性T細(xì)胞亞群Th1/Th2研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)了一種新型的分化發(fā)育和功能特征顯著不同的輔助性T細(xì)胞Th17。目前研究認(rèn)為Th17與集體抗胞外菌感染和一些自身免疫疾病的關(guān)系密切，因此探索Th17細(xì)胞的分化與調(diào)控將有助于認(rèn)識(shí)其在抗感染免疫和自身免疫性疾病中的作用機(jī)制，也有利于自身免疫性疾病生物學(xué)治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)。
　　 目的:探討

3、非諾貝特(fenofibrate)對(duì)自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠的治療效果及其對(duì)Th17細(xì)胞相關(guān)因子的作用機(jī)制。
　　 方法:1）體內(nèi)實(shí)驗(yàn):建立大鼠EAM模型;于免疫后第0天，治療組給予非諾貝特灌胃，EAM組給予生理鹽水灌胃。免疫后的第17天處死大鼠取心臟，通過(guò)心體重量比、HE染色，以及應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)心臟的ANP、BNP來(lái)評(píng)估心肌炎導(dǎo)致心衰的嚴(yán)重程度;同時(shí)分別檢測(cè)大鼠心臟及脾臟細(xì)胞TH17相關(guān)的IL-6、IL-17、R

4、OR-γ t、IL-23P19、FOX-p3細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)水平;進(jìn)一步應(yīng)用Western Blot分別檢測(cè)大鼠心臟及脾臟細(xì)胞中PPAR-α的蛋白變化。2）體外實(shí)驗(yàn):通過(guò)IL-6、TGF-β誘導(dǎo)脾細(xì)胞模擬體外自身免疫性炎癥過(guò)程，誘導(dǎo)組給予IL-6+TGF-β，非諾貝特組給予IL-6+TGF-β+非諾貝特。細(xì)胞培養(yǎng)48h后應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)IL-17、ROR-γ t、FOX-p3的mRNA表達(dá)水平;進(jìn)一步在非諾貝特組的基礎(chǔ)上給予

5、PPAR-α阻斷劑MK886后再次檢測(cè)IL-17、ROR-γ t、FOX-p3的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，非諾貝特組大鼠的心體重量比和心肌的炎癥浸潤(rùn)程度與EAM組相比有明顯減輕，反映心衰的指標(biāo)ANP、BNP水平也顯著降低，Th17分化相關(guān)因子IL-6、IL-17、ROR-γ t、IL-23P19的表達(dá)水平呈下降趨勢(shì)，而抑制Th17分化的特異性FOX-p3因子在非諾貝特治療組明顯升高;此外，PPAR-α蛋白表達(dá)水平在非