大葉蒟抗抑郁物質(zhì)基礎(chǔ)及分析方法研究.pdf

1、大葉蒟Piper laetispicum C.DC.，為胡椒科胡椒屬植物，主要分布在我國廣東、廣西、云南及海南省。民間用于活血、消腫、止痛，主治跌打損傷、瘀血腫痛。近期研究發(fā)現(xiàn)大葉蒟具有較強的抗抑郁作用，其活性和一系列酰胺類化合物有關(guān)。為進(jìn)一步研究大葉蒟抗抑郁物質(zhì)基礎(chǔ)及其分析方法，服務(wù)于新藥開發(fā)，本課題采用反向研發(fā)模式，即從藥材入血成分出發(fā)，進(jìn)行入血成分分析、制備及結(jié)構(gòu)鑒定，然后對得到的單體化合物進(jìn)行抗抑郁活性篩選，確定大葉藥抗抑郁主要

2、活性成分。最后，本課題開發(fā)了一種大葉藥多成分分析方法，可以為大葉蒟活性成分的進(jìn)一步開發(fā)提供技術(shù)支持，也可以作為將來大葉蒟中間體及制劑的含量測定方法。本研究主要包括以下四個方面：
　　 ⑴入血成分分析。利用體內(nèi)抗抑郁動物模型對大葉藥進(jìn)行抗抑郁活性驗證，結(jié)果表明大葉蒟提取物顯示較好的抗抑郁活性。采用腸外翻囊模型進(jìn)行大葉蒟入血成分的分析，結(jié)果顯示大葉蒟醇提取物中除個別化合物外，其余化合物均能夠在腸吸收透過液中被檢測到，以母液19個色譜

3、峰計，在十二指腸吸收液中檢測到16個，結(jié)腸和空腸中分別檢測到15個，直腸中檢測到10個。這說明大葉蒟醇提物中大多數(shù)化合物均可以入血。
　　 ⑵入血成分制備和結(jié)構(gòu)確認(rèn)。以大葉蒟入血成分的HPLC色譜圖為參照，采用大孔樹脂富集，硅膠柱分離，F(xiàn)lash快速制備等手段，得到14個單體化合物，其中12個為酰胺類化合物，化合物G13-1(1-[(2E，4E，7E)-9-(3，4-次甲二氧基苯)九碳二烯酰]四氫吡咯)和G13-2(1-[(2E

4、，7E)-N-7-(3，4-次甲二氧基苯)九碳二烯酰]四氫吡咯)為新化合物，G9((2E，4E)-N-異丁基-9-(3，4-次甲二氧基苯)七碳二烯酰胺)、G12(5’-甲氧基-3’，4’-次甲二氧基桂皮酸四氫吡咯)和G14(1-[(2E，4E)-9-(3，4-次甲二氧基苯)七碳二烯酰]四氫吡咯)為大葉蒟中首次分離的化合物。經(jīng)HPLC-PDA測定，12個酰胺類化合物純度均能達(dá)到98％以上，可以在后續(xù)的研究中作為對照品使用。
　　

5、⑶活性研究。采用小鼠尾懸吊和小鼠強迫游泳抗抑郁模型對部分化合物進(jìn)行活性研究，結(jié)果表明化合物G5、G6和G11均具有明顯的抗抑郁活性，其中G5和G6與空白對照組比較具有顯著性差異，強于相同劑量的陽性藥氟西汀組。G6為大葉藥素，其活性研究結(jié)果和文獻(xiàn)報道的基本吻合，表明大葉蒟酰胺類生物堿是大葉藥抗抑郁活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 ⑷分析方法研究。建立了能同時測定大葉藥中12個酰胺類生物堿的HPLC分析方法。該方法能夠很好的分離12個生物堿并

6、且有效避免了其他雜質(zhì)的干擾。方法中色譜柱采用了C18色譜柱、流動相：乙腈-水(0 min，55:45；20 min，60:40；30min，90:10；32min，55:45；37 min，55:45，)，流速為1 ml/min，DAD檢測器。該方法簡單、快速、專屬性強，穩(wěn)定性好，可以用于大葉藥藥材及相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。本實驗還探索了一測多評技術(shù)在大葉藥酰胺類化合物含量測定中的應(yīng)用，結(jié)果表明該方法校正因子在不同條件下相對穩(wěn)定，但是色譜峰