大葉蒟抗抑郁有效部位制備工藝、質量標準研究及大葉蒟揮發(fā)油化學成分研究.pdf

1、本課題組從我國25種胡椒屬植物中篩選出大葉藥(PiperlaetispicumC.DC.)作為目標植物,展開天然抗抑郁藥物的研究。大葉藥(P.laetispicumC.DC.)為胡椒科胡椒屬植物,主要分布于我國的廣東、廣西、云南和海南等省,民間異名小腸風、山胡椒、野胡椒,主要用于活血、消腫、止痛[1]。通過對其藥理作用和有效成分的研究,確定該植物乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位的抗抑郁活性最強,laetispicine為主要活性化合物。

2、r>　　 本文的選題以開發(fā)中藥五類新藥(天然藥物中提取的有效部位)為目標,按照該課題要求并參照國家藥品監(jiān)督局頒布的《新藥審批辦法》,從新藥的制備工藝、質量標準兩方面進行研究,以大葉藥提取物中的有效部位群“酰胺類化合物”作為研究對象,建立了該類化合物含量測定方法和最佳提取與純化方法,并為此進行了有效部位化學成分的分離。為大葉藥抗抑郁新藥的開發(fā)打下良好的基礎。
　　 在對大葉藥藥理活性和化學成分進行研究時,發(fā)現其乙醇提取物中存在大

3、量油性成分。近年來,國內外對胡椒屬植物揮發(fā)油的殺蟲、抗菌、抗氧化等活性也多有報道。
　　 本文包括以下5方面內容:
　　 1.酰胺類化合物對照品的制備
　　 經過反復硅膠柱層析和制備HPLC法分離得到5種酰胺類化合物。
　　 利用波譜技術(包括UV,IR,MS,1H-NMR,13C-NMR)鑒定結構,分別為N-isobutyl-(3',4'-methylenedioxyphenyl)-2E,4E-hept

4、adienamide、laetispiamideA、laetispiamideB、laetispicine和Dihydropipercide。
　　 2.總生物堿的含量測定方法
　　 首次建立了紫外分光光度法和半微量凱式定氮法兩種含量測定方法,測定大葉蒟抗抑郁有效部位總生物堿的含量,方法簡便,可行。
　　 3.抗抑郁有效部位制備工藝研究
　　 首次將“星點設計-效應面法”引入大葉藥提取工藝研究,該方法簡便

5、,試驗次數較少。在模型建立上采用非線性數學模型擬合,復合相關系數較高,預測值更接近真實值(RSD=3.5％)。
　　 創(chuàng)建了大葉藥抗抑郁有效部位最佳提取與純化工藝,采用氮測定法測定酰胺類化合物含量最高可達58％。
　　 提取工藝:考察乙醇濃度、提取時間及提取溶劑用量和提取次數各因素對總生物堿提取率的影響。以總生物堿含量為指標對提取工藝進行優(yōu)化,實驗采用星點設計一效應面法,優(yōu)化工藝條件為70％乙醇為提取溶劑,乙醇用量為藥材

6、12倍(提取3次,每次回流30min)。
　　 純化工藝研究:篩選液一液萃取法分離有效部位總生物堿含量最高的最佳工藝條件。大葉藥浸膏用蒸餾水配制為濃度為100mg/mL的料液,3倍量石油醚脫脂后,乙酸乙酯:水=4:1萃取,減壓蒸干溶劑,得有效部位浸膏。
　　 4.5種酰胺類化合物的含量測定
　　 首次建立了同時測定大葉藥中5個主要的酰胺類單體指標成分N-isobutyl-(3',4'-methylenedioxy

7、phenyl)-2E,4E-heptadienamide、laefispiamideA、laetispiamideB、laetispicine和Dihydropipercide含量的高效液相色譜分析方法,為制定大葉藥抗抑郁活性部位的指紋圖譜奠定了一定的基礎。
　　 該方法簡便可行,為原料藥其質量控制提供依據。色譜條件為甲醇:水(V/V)=77:23,流速1.5mL/min,259nm檢測。首次對大葉藥中5種指標成分進行了初步的定

8、性和定量的研究。考察了三批大葉蒟不同營養(yǎng)器官中各化合物的含量。其中果實中l(wèi)aetispicine的含量最高,粗枝中l(wèi)aetispicine的含量也較高,根的laetispiamideA的含量最高,(分別約占原植物的1.1‰、0.2％0和1.6‰)。
　　 首次提出以laetispicine作為大葉藥特征性成分,從同科屬植物中鑒別大葉藥。對我國10種其它胡椒屬植物中各化合物的含量進行測定,均未能檢出大葉藥抗抑郁活性成分laetis

9、piamideA、laetispiamideB和laetispicine,并且laetispicine周圍沒有干擾成分。
　　 5.大葉蒟不同部位和黑胡椒揮發(fā)油化學成分的研究
　　 采用GC-MS首次分析了大葉藥根、莖、葉、果實和黑胡椒的揮發(fā)油化學成分,并將各揮發(fā)油的主要成分進行了對比。共鑒定出化合物189個(根,64個;莖,93個;葉,87個;果實,58個;黑胡椒,42個),鑒定率均在90％以上。
　　 通過將