肺形草、菊三七的物質(zhì)基礎及分析方法研究.pdf

1、中藥現(xiàn)代化的重要目標之一是質(zhì)量穩(wěn)定、可控.如何提高中藥的質(zhì)量控制水平是中藥現(xiàn)代化亟待解決的關鍵問題。而中藥的物質(zhì)基礎和分析方法研究是提高中藥質(zhì)量控制水平的前提。
　　 本文運用多種色譜及其聯(lián)用技術，以肺形草、菊三七和參麥注射液為研究對象，分別研究建立中藥三類化學成分-有效成分、有毒成分和無效成分的定性定量分析方法，為中藥及其制劑的質(zhì)量控制和合理應用提供科學依據(jù)。主要研究內(nèi)容及成果如下：
　　 1.采用多種色譜分離技術從肺

2、形草的70％乙醇提取物中分離得到6個化合物。綜合運用ESI-MS、TOF-MS、1H NMR、13C NMR、1H-1HCOSY、HMQC、HMBC等波譜學手段鑒定了它們的結(jié)構(gòu)。其中4個為有較好抗氧化活性的咄酮類化合物，其余2個為首次從雙蝴蝶屬植物中分離得到，且有1個為新化合物。
　　 2.選用填料直徑為1.8μm的快速分離高通量柱(RRHT)，建立了肺形草中咄酮類成分的含量測定方法。對所建色譜方法的信號采集、柱溫、流速和進樣體

3、積等參數(shù)進行了優(yōu)化，并進行了系統(tǒng)適用性試驗。四種咄酮在6分鐘內(nèi)實現(xiàn)了基線分離，濃度在0.75-300μg/ml之間時，標準曲線的相關系數(shù)(R2)為0.9992-1.0000；檢測限達0.1-0.3μg/ml。該方法實現(xiàn)了樣品的快速分離，提高了檢測靈敏度，降低了流動相的消耗。
　　 3.研究建立了菊三七中PAs和PANOs的HPLC-ESI-MSn定性分析方法，先對從菊三七中分得的3個PAs和1個PANO對照品直接進樣分析，PAN

4、O有明顯的[2M+H]+峰(豐度通常為100％)，再根據(jù)多級質(zhì)譜碎片離子分別推導PAs和PANOs的裂解規(guī)律。然后以這些規(guī)律為基礎，結(jié)合文獻報道和生物合成途徑，共鑒定或推測了20個PAs和PANOs，其中16個是首次從該植物中發(fā)現(xiàn)，tetrahydrosenecionine首次作為天然產(chǎn)物報道。
　　 4.采用35mM月桂酸-120 mM Tris-20％甲醇(V/V)的緩沖體系，建立了MEKC法測定菊三七中PAs含量的方法。千

5、里光菲靈堿和千里光堿濃度在3.1-200μg/ml之間時，標準曲線的相關系數(shù)(R2)為0.9916-0.9939；檢測限達1.0μg/ml。相比傳統(tǒng)的SDS-硼砂體系，具有分離效能高，分離時間短、電流強度小等優(yōu)點.該方法適用于菊三七藥材的質(zhì)量控制。
　　 5.研究建立了菊三七中PAs和PANOs的CZE-MS定量分析方法。緩沖液的組成為：20 mM醋酸銨-1％甲酸-5％甲醇(v/v)。采用電動進樣.場放大樣品堆積的在線富集技術，

6、提高靈敏度30-200倍。PAs和PANOs的檢測限分別達到0.01和0.1 ng/ml.該方法快速、靈敏，適用于中藥中痕量PAs和PANOs的檢測。
　　 6.研究建立了HPLC-ELSD法測定參麥注射液中糖類成分含量的方法。色譜柱為氨基柱；流動相為乙腈.水體系。D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖和麥芽糖的濃度在0.025～1.000 mg/ml之間時，標準曲線的相關系數(shù)(R2)為0.9983-0.9992。另外采用苯酚.硫酸法和冷凍