西瓜噬酸菌基因Aave-3192、Aave-2108和Aave-4679、Aave-2716的功能研究.pdf

1、通過對(duì)本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的西瓜噬酸菌的Tn5插入突變體庫(kù)進(jìn)行篩選，從中獲得2株致病性喪失、群體感應(yīng)信號(hào)增強(qiáng)、胞外多糖的產(chǎn)量下降并喪失煙草過敏性反應(yīng)的菌株，分別為166和167。進(jìn)一步通過亞克隆技術(shù)，獲得了這2株菌株的Tn5插入位置，其插入基因分別為 Aave-3192和 Aave-2108，這兩個(gè)基因分別編碼Hypothetical protein和Methyl-accepting chemotaxis sensory transducer。

2、通過基因互補(bǔ)的方法構(gòu)建插入突變菌株的互補(bǔ)菌株，互補(bǔ)菌株的生物學(xué)測(cè)定結(jié)果表明，互補(bǔ)菌株的致病能力恢復(fù)，游動(dòng)性，群體感應(yīng)能力，胞外多糖的產(chǎn)量，生物膜的形成能力等功能也部分恢復(fù)，證明這兩個(gè)基因都與西瓜噬酸菌的致病性相關(guān)。
　　已有研究表明，西瓜噬酸菌存在遺傳分化，目前將西瓜噬酸菌分為兩個(gè)亞群，這兩個(gè)亞群的菌株在生物學(xué)特性方面存在較大的差異。本研究通過西瓜噬酸菌全基因組序列，設(shè)計(jì)16對(duì)菌毛基因引物，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明，有4對(duì)引物只

3、能擴(kuò)增出亞群Ⅱ菌株菌毛基因；于是，對(duì)其中的兩個(gè)菌毛基因 Aave-4679（pilA）和 Aave-2716（pilI）進(jìn)行定點(diǎn)突變，探討其功能，結(jié)果表明，菌毛基因pilA缺失后病菌的致病性下降，生物膜形成能力下降，游動(dòng)性減弱，群體感應(yīng)喪失，NA培養(yǎng)基上菌落形態(tài)發(fā)生變化，無(wú)菌裙產(chǎn)生，但有煙草過敏反應(yīng)；而 pilI基因缺失后病菌的游動(dòng)性下降，在NA培養(yǎng)基上菌落形態(tài)上較野生菌菌裙寬度變窄，而致病性、生物膜的形成能力等生物學(xué)特性與野生菌株一致