炔雌醇、炔諾酮和左炔諾孕酮對(duì)擬南芥根生長(zhǎng)的影響及三種激素ELISA的建立.pdf

1、人工合成甾類激素在醫(yī)學(xué)上廣泛應(yīng)用于避孕藥的合成和疾病的治療，在牲畜、水產(chǎn)養(yǎng)殖中作為動(dòng)物的生長(zhǎng)促進(jìn)劑。近年來(lái)大量甾類激素釋放進(jìn)入環(huán)境，因此醫(yī)院、藥廠和養(yǎng)殖廠附近的河流成為重要的污染源，許多國(guó)家河流中都檢測(cè)出人工合成甾類激素的存在。該文研究了甾類激素炔雌醇（EE2）、炔諾酮（NOR）和左炔諾孕酮（LNG）對(duì)擬南芥幼苗根生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明：1）30μg·L-1EE2處理顯著促進(jìn)主根的伸長(zhǎng)，促進(jìn)側(cè)根教及側(cè)根總長(zhǎng)的增加，促進(jìn)主根根毛數(shù)和地下部鮮

2、重的增加，且還增加內(nèi)源IAA和iPAs含量，增大IAA/iPAs比值；3000/μg·L-1 EE2處理則增加主根的彎曲度。2）NOR活性相對(duì)較弱，濃度為300/μg·L-1時(shí)對(duì)主根長(zhǎng)、側(cè)根數(shù)、側(cè)根總長(zhǎng)的促進(jìn)效果最大，IAA含量增加，而iPAs含量降低，IAA/iPAs比值最大；3000μg·L-1NOR則引起主根彎曲，抑制根毛的生長(zhǎng)，但促進(jìn)側(cè)根數(shù)的增加，增加地下部鮮重。3）LNG的活性較高，3μg·L-1時(shí)對(duì)擬南芥主根長(zhǎng)、主根根毛數(shù)增

3、大最為顯著，300μg·L-1時(shí)對(duì)側(cè)根數(shù)、根毛密度的增幅最大，IAA含量增加，IAA/iPAs比值最大；3000μg·L-1時(shí)顯著抑制主根的生長(zhǎng)和側(cè)根的生成。由此表明，環(huán)境中的甾類激素可以改變植物體內(nèi)的內(nèi)源激素水平來(lái)影響植物根的生長(zhǎng)發(fā)育，進(jìn)而影響植物的生長(zhǎng)習(xí)性及生理功能。
　　 甾類激素的檢測(cè)方法中有分光光度法、液相色譜法、薄層層析法及免疫檢測(cè)法等多種，其中以近幾年發(fā)展起來(lái)的免疫檢測(cè)法較為方便快捷。甾類激素不能直接用于人工抗原的

4、合成，必須加以修飾形成含羧基的物質(zhì)才能偶聯(lián)，合成人工抗原以便產(chǎn)生抗體。本實(shí)驗(yàn)將EE2、NOR和LNG改造成含羧基的中間產(chǎn)物，再采用碳二亞胺法及混合酸酐法將中間產(chǎn)物與牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）共價(jià)偶聯(lián)，合成免疫抗原EE2-BSA、NOR-BSA、LNG-BSA和包被抗原EE2-OVA、NOR-OVA、LNG-OVA，合成的人工抗原通過(guò)紫外光譜法進(jìn)行鑒定，并計(jì)算出蛋白質(zhì)半抗原偶聯(lián)比率分別為1：18（EE2-BSA）、1:16

5、（NOR-BSA）、1:20（LNG-BSA）、1:10（EE2-OVA）、1:8（NOR-OVA）、1:10（LNG-OVA）。用合成的抗原免疫新西蘭大白兔，制備的抗血清經(jīng)ELISA法測(cè)定抗體效價(jià)分別為1:12800（兔E1）、1:3200（兔E2）、1:6400（兔N1）、1：12800（兔N2）、1:6400（兔L1）、1:12800（兔L2）。交叉反應(yīng)率低于1％。建立了檢測(cè)EE2、NOR、LNG的競(jìng)爭(zhēng)抑制性ELISA方法，其靈敏