細(xì)胞色素b-,5-F58位突變體蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文細(xì)胞色素bF58位突變體蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)研究姓名：陸珺霞申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：無機化學(xué)指導(dǎo)教師：王韻華20020520復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文紫外可見光譜、熒光光譜及圓二色散光譜，監(jiān)測了鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白去折疊過程。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞色素bj及其突變體蛋白的變性是一協(xié)同過程，蛋白穩(wěn)定性的變化順序與熱穩(wěn)定性一致：Tbj(WideType)F58YF58W。細(xì)胞色素如與脫輔基肌紅蛋白的血紅素轉(zhuǎn)移反應(yīng)的動力學(xué)性質(zhì)，直接反映了細(xì)胞色

2、素b，中蛋白質(zhì)肽鏈和血紅素輔基相互結(jié)合的強度。研究表明，突變體蛋白的血紅素轉(zhuǎn)移反應(yīng)速率常數(shù)都大于野生型蛋白，脫輔基蛋白和血紅素結(jié)合強度順序為：T如(WildType)F58YF58w。由于細(xì)胞色素bj突變體的脫輔基蛋白穩(wěn)定性沒有太大的變化，因此這些實驗結(jié)果證明了，F(xiàn)58位的突變主要是對蛋白的血紅素疏水腔結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了擾動，影響了血紅素輔基和蛋白肽鏈之間的結(jié)合。這種血紅素輔基和蛋白肽鏈結(jié)合的改變，是因為用不同的芳香殘基取代后，雖然58位芳環(huán)與

3、周圍芳環(huán)之間的堆積作用仍然存在，但對蛋白穩(wěn)定性的作用大小有所改變。同時由于替代氨基酸殘基的體積、疏水性及形成氫鍵能力等方面性質(zhì)不同，所以也對蛋白的穩(wěn)定性產(chǎn)生了一定的影響。在突變體蛋白的結(jié)構(gòu)研究基礎(chǔ)上，我們對突變體蛋白的電子傳遞功能性質(zhì)進行了研究。用光譜電化學(xué)方法表征了細(xì)胞色素bj野生型及突變體的氧化還原電位，當(dāng)58位的苯丙氨酸被酪氨酸取代后，表觀還原電位向正方向移動了26mV；而被色氨酸取代后，則向負(fù)方向移動了7mV。用紫外可見差譜測得

4、了細(xì)胞色素bj與細(xì)胞色素c的結(jié)合常數(shù)，細(xì)胞色素如野生型的KA為578x106M～；F58Y的KA為518106M一：F58WKA為264x106M～。用stoppedflow快速動力學(xué)技術(shù)，測定了細(xì)胞色素bJ及其突變體蛋白與細(xì)胞色素c在擬一級條件下的電子傳遞速率。細(xì)胞色素b5與細(xì)胞色素c電子傳遞速率常數(shù)k12順序為：wTF58YF58W。由以上的研究結(jié)果推斷，F(xiàn)58W電子傳遞速率的減慢，主要是由于其與細(xì)胞色素c的結(jié)合能力的降低引起的，F(xiàn)