Neurofibromin在癲癇動物模型中的表達及功能.pdf

1、第一部分Neurofibromin在癲癇動物模型中的表達
　　目的：研究Neurofibromin在匹魯卡品癲癇模型大鼠腦組織的時空變化規(guī)律，從而探討與癲癇的相關性。
　　方法：
　　1、將64只雄性成年的SD大鼠隨機地分為8個組:7個實驗組（各組n=8）和1個正常對照組（n=8）。7個實驗組分別為6小時、24小時、72小時、7天、14天、30天、60天。將7個實驗組的所有大鼠構建成氯化鋰-匹羅卡品點燃的顳葉癲癇模型<

2、br>　　2、分別采用免疫組化，免疫熒光及Western blot技術檢測Neurofibromin在氯化鋰-匹魯卡品模型大鼠海馬及皮質中表達的時間及空間的變化規(guī)律。
　　結果：
　　1、免疫組化結果顯示Neurofibromin在神經(jīng)元胞漿表達，主要在海馬DG區(qū)、CA1、CA2及CA3區(qū)和皮質表達。與對照組相比，可以觀察到實驗組在點燃后6小時、24小時、72小時、1周、2周、1月、2月表達逐漸增高，其中有顯著差異從1周（P

3、<0.05）開始，在海馬組織中表達在2月時達高峰，在皮質1月達高峰，在2月時較1月稍低。
　　2、免疫熒光結果顯示Neurofibromin在點燃后大鼠海馬及皮質神經(jīng)元上表達，而不與神經(jīng)膠質細胞共表達。
　　3、Western blot結果顯示Neurofibromin在點燃后大鼠海馬及皮質中1周時升高具有顯著差異（P<0.05），之后逐漸升高，在海馬組織中高峰在2月，而皮質中高峰在1月，其表達規(guī)律與免疫組化所觀察到的結果一

4、致。
　　結論：Neurofibromin在癲癇模型大鼠腦組織中神經(jīng)元表達，各個時間點的表達增加，在海馬及皮質均從1周時表達升高具有顯著差異，在海馬中2月達高峰，在皮質1月達高峰，提示Neurofibromin可能參與癲癇的發(fā)生發(fā)展。
　　第二部分Neurofibromin在癲癇動物模型癇性發(fā)作中的功能
　　目的：探討Neurofibromin在匹魯卡品癲癇模型大鼠癇性發(fā)作中的功能。
　　方法：
　　1、選

5、取雄性成年SD大鼠32只，隨機分成4個實驗組（各組n=8）：正常對照組、生理鹽水組、空載體組、siRNA組。對生理鹽水組、空載體組及siRNA組的大鼠海馬區(qū)分別注射生理鹽水、空載體、Neurofibromin干擾病毒，注射藥物7天后將4個組的所有大鼠腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品，然后觀察各組大鼠癇性發(fā)作的潛伏期、持續(xù)時間及發(fā)作頻率變化。
　　2、采用Western blot技術檢測上述大鼠7天時海馬區(qū)Neurofibromin表達量變

6、化。
　　結果：
　　1、各組大鼠癇性發(fā)作的潛伏期變化：對各組大鼠癇性發(fā)作的潛伏期進行統(tǒng)計后結果為：正常對照組為（20.29±4.23）min、生理鹽水組為（19.25±5.55）min、空載體組為（18.62±6.38） min、siRNA組為（29.00±5.35）min。siRNA組的潛伏期比其他三組明顯延長，差異具有顯著性（P<0.05），而其他三組的潛伏期無顯著差異。
　　2、各組大鼠癇性發(fā)作的頻率變化：統(tǒng)計

7、各組大鼠腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品后2小時內發(fā)作次數(shù)為：正常對照組為16.63次、生理鹽水組為16.79次、空載體組為17.92次、siRNA組為6.86次。siRNA組的發(fā)作頻率較其他三組明顯縮短，差異具有限制性（P<0.05），而其他三組發(fā)作頻率無顯著差異。
　　3、各組大鼠癇性發(fā)作的持續(xù)時間變化：對各組大鼠癇性發(fā)（Racine評分為4級及以上）的持續(xù)時間進行統(tǒng)計后結果為：正常對照組為（22.00±4.69）min、生理鹽水組為

8、（24.29±4.42）min、空載體組為（22.50±3.78） min、siRNA組為（16.29±2.29） min。siRNA組的持續(xù)時間較其他三組明顯縮短，差異具有顯著性（P<0.05），而其他三組無顯著差異。
　　4、Western blot結果顯示在注射藥物7天Neurofibromin在siRNA組蛋白表達量較其他三組明顯降低，差異具有顯著性（P<0.05），而其他三組蛋白表達量無顯著差異。
　　結論：siR