HIF-1α與TfR mRNA在腦白質(zhì)軟化動(dòng)物模型中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　建立新生4天SD大鼠腦室周圍白質(zhì)軟化模型（periventricular lerkomalacia,PVL）。在構(gòu)建PVL模型大鼠的條件下，研究HIF-1α對(duì)TfRmRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)，為缺氧缺血腦病發(fā)生機(jī)制與腦鐵代謝之間關(guān)系的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)依據(jù)。
　　方法：
　　1．4日齡新生SD大鼠通過(guò)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為兩組：PVL組和對(duì)照組；PVL組采用分離結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈并予缺氧的方法建立腦室周圍白質(zhì)軟化新生大鼠動(dòng)

2、物模型；對(duì)照組僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不予結(jié)扎及缺氧。采用HE染色法觀察腦組織病理學(xué)改變，Westernblot法檢測(cè)MBP蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育及神經(jīng)行為學(xué)等方法對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　2．設(shè)立（1）對(duì)照＋HIF-1α組（2）對(duì)照＋空白組（3）PVL＋抗HIF-1α組（4)PVL＋PBS組；及（1）對(duì)照＋PBS組（2）對(duì)照＋抗 HIF-1α組（3）PVL＋PBS組（4）PVL＋抗HIF-1α組；以Westernblot技術(shù)測(cè)H

3、IF-1α表達(dá)，以Real-timePCR技術(shù)測(cè)TfRmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1．對(duì)4日齡新生SD大鼠進(jìn)行雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎并予以缺氧后，模型組與對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠生長(zhǎng)緩慢（P<0.01），睜眼時(shí)間延遲（21.67±1.19d VS15.54±1.60d），懸崖逃避能力及雙臂懸吊能力均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。在水迷宮實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠在水中尋找站臺(tái)的游泳速度減慢、尋找站臺(tái)的所用的時(shí)間延長(zhǎng)、撤

4、去平臺(tái)后在平臺(tái)所在象限停留時(shí)間縮短(P＜0.05)。
　　2．腦組織HE染色，模型組術(shù)后24小時(shí)、48小時(shí)可見彌散性皮質(zhì)下和腦室周白質(zhì)疏松水腫。
　　3．Western blot法顯示，HI1周后模型組MBP表達(dá)量較對(duì)照組降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4．對(duì)照＋PBS組與PVL＋PBS組對(duì)比，Westernblot法檢測(cè)后者HIF-1α蛋白表達(dá)增加，Real-timePCR檢測(cè)TfRmRNA的表達(dá)也增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義。
　　5．對(duì)照＋HIF-1α組與對(duì)照＋空白組對(duì)比，Westernblot法檢測(cè)前者HIF-1α表達(dá)增多，Real-time PCR檢測(cè)TfRmRNA的表達(dá)也增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6．PVL＋抗HIF-1α組與PVL＋PBS組對(duì)比，Westernblot法檢測(cè)后者HIF-1α表達(dá)增多，Real-timePCR檢測(cè)TfRmRNA的表達(dá)也增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1．通過(guò)對(duì)4日齡新生SD大

6、鼠進(jìn)行雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎聯(lián)合缺氧的方法，可建立與人類早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化病理相似的PVL動(dòng)物模型。
　　2．缺氧缺血PVL可見HIF-1α表達(dá)增多，TfRmRNA的表達(dá)也增多；
　　3．PVL模型中，抑制腦組織中HIF-1α的活性，TfRmRNA表達(dá)量隨之減少，增加HIF-1α的表達(dá)，TfRmRNA表達(dá)量隨之增加。即可推斷HIF-1α可誘導(dǎo)TfRmRNA表達(dá)增加。
　　4．TfRmRNA表達(dá)的增加，可能是腦缺氧缺血后鐵