HIF-1α及VEGF在缺氧缺血胎鼠腦組織中表達的研究.pdf

1、目的:利用宮內缺氧缺血性腦損傷動物模型,探討腦損傷后不同復氧時間胎鼠腦組織中缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)及血管內皮生長因子(VEGF)在mRNA和蛋白水平的表達規(guī)律。
　　 方法:將32只孕19天Wistar大鼠,按受孕先后順序分為1個對照組及7個實驗組,每組4只。在水合氯醛麻醉下行開腹,暴露雙側子宮,對照組只暴露雙側子宮15分鐘,隨即取胎鼠腦組織;實驗組央閉子宮動脈15分鐘,即建立宮內缺氧缺血性腦損傷動物模型,分別于雙側

2、子宮恢復血供后0、2、4、8、12、24及48小時取胎鼠腦組織。應用HE染色光鏡下進行病理觀察,以確定動物模型是否建立成功。應用Real-Time PCR方法檢測HIF-1α及VEGF的mRNA表達;應用免疫組織化學法檢測HIF-1α及VEGF的蛋白表達定位。
　　 結果:1.HE染色光鏡下結果:對照組未見明顯病理改變;實驗組出現不同程度的細胞體腫脹,細胞排列紊亂等病理改變,可見動物模型建立成功。2.Real-TimePCR檢測

3、結果:對照組及各實驗組均檢測到HIF-1α及VEGF mRNA。(1)HIF-1α mRNA在對照組的2(-△△Ct)值為1.025±0.263:在0、2及4小時組的2(-△△Ct)值分別是1.067±0.267、1.240±0.372及1.176±0.280,三組與對照組比較無統(tǒng)計學意義;在8及12小時組的2(-△△Ct)值分別為1.375±0.273及1.450±0.151,兩組與對照組比較,明顯升高:在24及48小時組的2(-△△

4、Ct)值分別為0.954±0.116及0.989±0.222,兩組與12小時組比較,明顯降低,與對照組比較無統(tǒng)計學意義。(2)VEGF mRNA在對照組的2(-△△Ct)值為1.004±0.097,;在0、2及4小時組的2(-△△Ct)值分別是1.027±0.477,1.279±0.176及1.373±0.337,三組與對照組比較無統(tǒng)計學意義;在8及12小時組的2(-△△Ct)值分別為1.524±0.217及1.770±0.359,兩組

5、與對照組比較,P＜0.05,明顯升高;在24及48小時組的2(-△△Ct)值分別為1.062±0.272及1.073±0.053,兩組與12小時組比較,P＜0.05,明顯降低,與對照組比較無統(tǒng)計學意義。3.免疫組織化學法檢測:(1)對照組HIF-1α蛋白幾乎不表達,實驗組HIF-1α蛋白主要在大腦皮層及海馬等區(qū)神經元細胞的細胞核及細胞漿中表達。VEGF在大腦皮層及海馬等去神經元細胞的細胞漿中表達。(2)HIF-1α蛋白在對照組平均光密度

6、值為0.2902±0.0223,在0、2及4小時組的平均光密度值分別是0.2994±0.04176,0.3060±0.04053及0.3086±0.03960,三組與對照組比較無統(tǒng)計學意義;在8及12小時組的平均光密度值分別為0.3276±0.00631及0.3638±0.02168,兩組與對照組比較,P＜0.05,明顯升高;在24及48小時組的平均光密度值分別為0.2856±0.00814及0.2808±0.00415,兩組與12小時

7、組比較,P＜0.05,明顯降低,與對照組比較無統(tǒng)計學意義。(3)VEGF蛋白在對照組平均光密度值為O.2034±0.0053,在0、2及4小時組的平均光密度值分別是0.2096±0.0057,0.2070±0.0059及0.2096±0.0079,三組與對照組比較無統(tǒng)計學意義;在8及12小時組的平均光密度值分別為0.2280±0.0093及0.2479±0.0077,兩組與對照組比較,P＜0.05,明顯升高;在24及48小時組的平均光密