2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是廣泛分布于真核細(xì)胞中的一類在形態(tài)、功能上保守的細(xì)胞器。在形態(tài)學(xué)上,可以將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分為管狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、片層狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)兩大基本形態(tài),并且這兩種形態(tài)發(fā)揮著不同的生理功效。現(xiàn)已有研究發(fā)現(xiàn),許多蛋白質(zhì)參與到了管狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)的維持這一過程中。Seylp蛋白是酵母體內(nèi)的一類dynamin家族GTPase膜嵌GTPase蛋白,定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并在管狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)處富集。有研究表明Seylp與其哺乳動物同源蛋白A1tastin對管狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的形態(tài)維持起到關(guān)鍵的作用。

2、為了研究Seylp蛋白如何維持管狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài),以及其探究其介導(dǎo)膜的融合/裂解方面的分子機制,本研究從結(jié)構(gòu)生物學(xué)、生物化學(xué)的角度出發(fā)來研究Seylp蛋白在對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)塑形方面的精確工作機制。
   本實驗首先成功構(gòu)建了Seylp的N端胞漿區(qū)全長的載體,然后通過二級結(jié)構(gòu)預(yù)測、胰酶不完全降解實驗、質(zhì)譜分析以及對Seylp結(jié)構(gòu)域的分析,確定了不同的克隆片段,并將蛋白在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),利用不同的純化方法最到了高純度的蛋白。接下來,通過分子

3、篩層析分析、GTPase酶活分析等手段確定了具有生物學(xué)活性且性質(zhì)穩(wěn)定的蛋白片段。在此基礎(chǔ)上對相應(yīng)蛋白進(jìn)行了晶體的篩選工作,最終得到了相應(yīng)的蛋白晶體,但X衍射初步分析表明,晶體的衍射效果不佳。
   為了提高晶體的衍射質(zhì)量,對蛋白進(jìn)行了不同處理,對結(jié)晶條件進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化,并通過對晶體本身進(jìn)行了不同方式的處理。通過綜合運用以上手段,極大的提高了晶體的衍射質(zhì)量。通過目前所得到的研究結(jié)果,使我們對Seylp蛋白發(fā)揮生理功效的方式有了進(jìn)

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