內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白和黏蛋白2在小鼠結(jié)腸炎中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景：炎癥性腸病(IBD)是一種慢性非特異性腸道炎性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)兩種。近年來隨著生活條件的改善和環(huán)境不斷變化，該病在我國的患病人數(shù)呈明顯增加趨勢。炎癥性腸病的病因和發(fā)病機制尚不明確，目前多認(rèn)為該病的發(fā)生是由遺傳、環(huán)境、微生物和免疫等多種因素相互作用所致。
　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)是真核細(xì)胞內(nèi)負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)合成、折疊和分泌的重要細(xì)胞器，許多因素可以引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)紊亂，如營養(yǎng)缺乏、氧化應(yīng)激等，導(dǎo)致未折疊或錯誤

2、折疊蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔堆積，引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)。當(dāng)出現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時，機體將啟動一系列適應(yīng)性反應(yīng)使細(xì)胞適應(yīng)應(yīng)激繼續(xù)存活，這種反應(yīng)稱為未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)。未折疊蛋白反應(yīng)通過三種感受器蛋白發(fā)出一系列調(diào)節(jié)信號，通過限制蛋白質(zhì)翻譯減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)負(fù)荷，幫助蛋白質(zhì)正確折疊，加速錯誤折疊蛋白質(zhì)降解，恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激持續(xù)時間過長或反應(yīng)程度過深將會引起細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致組織細(xì)胞受損。腸道上皮細(xì)胞不斷更新，屬于高分泌細(xì)胞，對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激尤其敏感。

3、
　　近年來研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與多種疾病發(fā)生發(fā)展有關(guān)，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的未折疊蛋白反應(yīng)多條通路與炎癥反應(yīng)通路相偶聯(lián)。有人提出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與炎癥性腸病的發(fā)生與發(fā)展，但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對炎癥性腸病的具體作用機制尚不明確。
　　腸粘膜屏障損傷是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的一個關(guān)鍵因素，大量黏蛋白構(gòu)成的粘液層是腸粘膜重要的化學(xué)屏障，杯狀細(xì)胞產(chǎn)生的黏蛋白(MUC)2是結(jié)腸粘液層主要的大分子結(jié)構(gòu)，有研究表明 MUC2表達(dá)異常與腸道疾病密切相關(guān)。

4、　　本研究利用葡聚糖硫酸鈉(DSS)制造小鼠結(jié)腸炎模型，檢測炎癥狀態(tài)下結(jié)腸組織的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白和 MUC2的表達(dá)情況，試圖為進(jìn)一步認(rèn)識炎癥性腸病的發(fā)病機制提供更多科學(xué)依據(jù)。
　　目的：觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白 GRP78、PERK、ATF6、IRE1βmRNA和蛋白， IRE1α、CHOP、XBP1u和 XBP1s mRNA以及 MUC2 mRNA和蛋白在不同濃度 DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎組織中的表達(dá)情況，探討這些分子表達(dá)變化在炎癥過程中的意

5、義。
　　方法：將8周齡雄性 C57BL/6小鼠隨機分為三組：正常對照組：正常自由飲水；1.5％DSS組和2.5%DSS組：分別自由飲用含1.5%(1.5g/100ml)和2.5%DSS的水溶液6天建立急性腸炎模型。每組10只。通過疾病活動指數(shù)(DAI)評分、測量結(jié)腸長度、蘇木素伊紅(HE)染色病理評分、檢測炎性因子 TNFα和 IL-6 mRNA的表達(dá)水平來評估結(jié)腸炎癥損傷程度。采用免疫組織化學(xué)(IHC)染色法檢測結(jié)腸組織中 G

6、RP78、IRE1β、ATF6、PERK和 MUC2的蛋白表達(dá)水平；實時定量PCR(RT-PCR)法檢測 GRP78、IRE1α、IRE1β、PERK、ATF6、XBP1u、XBP1s、CHOP和 MUC2的 mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.正常對照組無結(jié)腸炎表現(xiàn)，1.5%DSS組和2.5%DSS組分別呈輕度和重度結(jié)腸炎。炎性細(xì)胞因子 TNFα和 IL-6 mRNA在1.5%DSS組表達(dá)增加，在2.5%DSS組表達(dá)進(jìn)

7、一步增加。
　　2.免疫組化結(jié)果：GRP78、IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2蛋白在正常對照組均表達(dá)；IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2蛋白在1.5%DSS組表達(dá)減少；GRP78、IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2蛋白在2.5%DSS組表達(dá)均明顯減少；IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2在2.5%DSS組與1.5%DSS組表達(dá)差別不明顯。
　　3. RT-PCR結(jié)果：GRP78、IRE1α、I

8、RE1β、PERK、ATF6、XBP1u、XBP1s、CHOP和 MUC2 mRNA在正常對照組均表達(dá)；GRP78、CHOP mRNA在1.5%DSS組無變化，2.5%DSS組明顯減少；XBP1u mRNA三組之間無差異；IRE1α、IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2 mRNA在1.5%DSS組和2.5%DSS組表達(dá)均減少，2.5%DSS組與1.5%DSS組之間無差別。
　　結(jié)論：
　　1.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白 GRP78