內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)T淋巴細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)及潰瘍性結(jié)腸炎患者炎性因子表達(dá)的影響研究.pdf

1、目的：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要的作用，但其發(fā)病作用機(jī)制尚不明確。本課題通過對(duì)激活的人T淋巴細(xì)胞系、小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞及潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmicreticulumstress,ER-stress）刺激，比較X-盒結(jié)合蛋白1(X-boxbindingprotein1,XBP1)剪切形式（XBP1splicing,XBP1s）及炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平變化，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)T淋巴細(xì)胞

2、功能的調(diào)控作用及潰瘍性結(jié)腸炎患者對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的變化。
　　方法：分別復(fù)蘇、培養(yǎng)Jurkat細(xì)胞及體外培養(yǎng)小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞，將實(shí)驗(yàn)分為4組：分別為空白對(duì)照組、植物血凝素（Phytohemagglutinin，PHA）或刀豆蛋白A（ConcanavalinA，ConA）刺激組、毒胡蘿卜素（Thapsigargin，TG，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+ATP酶抑制劑）刺激組、PHA/ConA和TG聯(lián)合刺激組，刺激細(xì)胞，12小時(shí)后收集細(xì)胞提取RNA，通

3、過RT-PCR檢測(cè)XBP1剪切形式，通過實(shí)時(shí)定量PCR（Q-PCR）檢測(cè)細(xì)胞因子IL-2、IFN、IL-17α表達(dá)變化。選取自2012年5月至2013年3月在中國(guó)人民解放軍第309醫(yī)院消化科就診患者，按照2007年在濟(jì)南制定的“我國(guó)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎診斷治療規(guī)范的共識(shí)意見”標(biāo)準(zhǔn)分組：正常對(duì)照組8例和潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerativecolitis，UC）患者組11例（根據(jù)潰瘍性結(jié)腸炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，診斷為中重度者入選），抽取所有患者6-8ml外周

4、血分離提取單個(gè)核細(xì)胞，將所分離的細(xì)胞分4組，分別為空白對(duì)照組、PHA刺激組、TG刺激組、PHA和TG聯(lián)合刺激組，刺激12小時(shí)后收集細(xì)胞提取RNA，行普通PCR檢測(cè)XBP1剪切形式及實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-17α的表達(dá)情況，比較各組之間差異并進(jìn)行相關(guān)分析。
　　結(jié)果：1、PHA及TG聯(lián)合刺激刺激Jurkat細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)XBP1剪切形式較單獨(dú)刺激時(shí)明顯增強(qiáng)；
　　2、PHA、TG聯(lián)合刺激Jurkat細(xì)

5、胞時(shí)細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-17α表達(dá)水平較單獨(dú)刺激時(shí)明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　3、與ConA、TG單獨(dú)刺激小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞相比二者聯(lián)合刺激時(shí)XBP1剪切形式明顯增強(qiáng)；
　　4、與ConA、TG單獨(dú)刺激小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞相比二者聯(lián)合刺激時(shí)細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-17α表達(dá)水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　5、用PHA及TG單獨(dú)及聯(lián)合刺激正常人及潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血

6、單個(gè)核細(xì)胞后XBP1均發(fā)生剪切，且聯(lián)合刺激時(shí)剪切形式較明顯；但與正常人相比，潰結(jié)患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞發(fā)生剪切更明顯；
　　6、分別用PHA與TG單獨(dú)、聯(lián)合刺激正常人及潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合刺激組IL-2、IFN-γ、IL-17α表達(dá)水平均增高，但潰結(jié)患者炎性細(xì)胞因子的表達(dá)量較正常人明顯升高。
　　結(jié)論：1、在T細(xì)胞激活狀態(tài)下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可增加XBP1的剪切反應(yīng)，增強(qiáng)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)；
　　2、在