H9N2亞型AIV山東分離株全基因序列分析及其在豚鼠間的傳播.pdf

1、禽流感(Avian influenza, AI)是由禽流感病毒(AIV)引起的危害最嚴重的家禽傳染病之一。該病于1878年首先發(fā)現(xiàn)于意大利，隨后波及多個國家和地區(qū)，尤其是低致病性的H9N2亞型AIV的廣泛流行給世界的養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，雖然H9N2亞型AIV具有低致病性，但是當它與其他病原混合感染時能夠?qū)е潞芨叩陌l(fā)病率和死亡率。陳伯倫在1994年首次分離到H9N2亞型AIV，證實了H9N2亞型AIV在我國的存在(陳伯倫等，199

2、4)。研究發(fā)現(xiàn)，H9N2亞型AIV于2009年冬季到2010年春季曾在我過山東地區(qū)造成了廣泛的流行。
　　 為了加強對我國山東地區(qū)H9N2亞型禽流感病毒基因組遺傳變異情況的監(jiān)測，本研究以一株2008年山東省分離的H9N2亞型禽流感病毒(A/ Chicken/Shandong/01/2008)為研究對象，利用RT-PCR方法將擴增的該病毒的8個基因片段連接到pMD18-T載體上，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入Top10感受態(tài)細胞中，重組質(zhì)粒經(jīng)酶

3、切鑒定為陽性后進行序列測定。序列測定完成后用專業(yè)分析軟件與國內(nèi)外H9N2亞型AIV代表毒株的相應(yīng)基因序列進行同源性比較和遺傳進化分析。結(jié)果表明該山東分離株起源于歐亞群系，與該群系代表毒株的相應(yīng)基因具有很高的同源性，可能具有共同的祖先;通過對其血凝素裂解位點氨基酸組成的分析發(fā)現(xiàn)其HA裂解位點處的氨基酸序列為P-A-R-S-S-R，屬于低致病性H9N2亞型AIV;通過對其血凝素受體結(jié)合位點的分析發(fā)現(xiàn)該病毒HA蛋白第234位為亮氨酸，表明該分

4、離株能夠與哺乳動物唾液酸受體相結(jié)合而感染哺乳動物。
　　 為了研究該病毒在哺乳動物間的傳染能力，本研究以豚鼠為實驗動物，分為接種組、接觸感染組和氣溶膠被動感染組。定期采集豚鼠鼻洗液，檢測鼻洗液中的AIV，確定排毒情況;同時定期用AGI-30采集隔離器中的空氣樣品，以確定其中AIV氣溶膠的濃度;采集豚鼠的血液樣品，以檢測其抗體滴度。結(jié)果表明，在攻毒后第6～10天均能檢測到AIV氣溶膠，其濃度在第8天左右達到高峰，為1.19×105

5、 copies/m3 air;接種組和接觸感染組的豚鼠分別在攻毒后第2天和第4天檢測到排毒，氣溶膠被動感染組始終沒有檢測到排毒;接種組和接觸感染組分別在第7天和第14天檢測到抗體，氣溶膠被動感染組始終沒有檢測到抗體。這表明，豚鼠人工接種AIV之后可通過鼻腔排出病毒，污染飼料和飲水之后能引起與其接觸的健康豚鼠的感染，并且排出的病毒能形成氣溶膠，隨空氣流通傳播。
　　 同時本實驗對AIV經(jīng)氣溶膠感染途徑對豚鼠的感染劑量進行了研究。利