野生鼠兔與雞H9N2亞型流感病毒的分離與遺傳進(jìn)化分析.pdf

1、禽流感(avian influenza)，是由A型流感病毒引起的一種從呼吸系統(tǒng)疾病到嚴(yán)重全身性敗血癥的傳染性疾病。根據(jù)禽流感病毒的致病性強(qiáng)弱，可將禽流感分為高致病性禽流感(HPAI)、低致病性禽流感(LPAI)和無致病性禽流感(NPAI)3種。其中高致病性禽流感(HPAI)已經(jīng)被國際獸醫(yī)局(OIE)列為1類烈性傳染病。禽流感病毒在全球廣泛分布，宿主范圍廣，多種鳥類均可感染。現(xiàn)已證實(shí)，禽流感病毒廣泛分布于世界范圍內(nèi)的許多家禽(包括雞、火雞

2、、珍珠雞、鵪鶉、石雞、雉、鴕鳥、鵝和鴨)和野禽(包括野鴨、天鵝和各種野鳥等)，覆蓋88種22科。某些情況下，禽流感也會突破種屬特異性，感染豬、馬、鯨魚、雪貂等不容動物。尤其是禽流感病毒可能直接感染人，如H5、H7和H9亞型，并造成人的死亡。
　　 高原鼠兔是新發(fā)現(xiàn)的一種A型流感病毒的宿主，目前仍不清楚其在流感病毒傳播過程中所起的作用。本研究對青海省內(nèi)的高原鼠兔進(jìn)行了禽流感流行病學(xué)調(diào)查，在2008-2009年間，分別從青海省內(nèi)14

3、個(gè)不同的地區(qū)捕捉了138只鼠兔，采集了130份血清和817份組織樣品。通過血凝抑制試驗(yàn)，運(yùn)用H1-H13禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原檢測鼠兔血清，結(jié)果在鼠兔中檢測到有抗H1和H3亞型流感病毒的低水平抗體(≤3log2)，其中H3的反應(yīng)率為15.3％，H1的反應(yīng)率為0.8％。
　　 通過雞胚傳代接種，我們從鼠兔和雞的組織樣品中各自分離到1株H9N2亞型流感病毒。鼠兔分離病毒在第一和第二代傳代雞胚尿囊液中未檢測到血凝現(xiàn)象，而在在第三代死胚中檢測到

4、HA效價(jià)。雞的H9N2病毒分離自有典型流感癥狀的蛋雞。在蛋雞的肺臟、泄殖腔拭子和氣管拭子中都分離到了該H9N2病毒，且表現(xiàn)出了較高的血凝效價(jià)。
　　 利用RT-PCR技術(shù)分別擴(kuò)增了分離的2株H9N2流感病毒基因組的8個(gè)基因片段，將其分別克隆到PMD18-T載體后進(jìn)行序列測定，并將所測片段與GenBank中的相應(yīng)序列進(jìn)行比對，繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹，并進(jìn)行基因型分析。結(jié)果顯示：所克隆的基因片段均含有病毒基因完整的開放閱讀框，A/Pika/

5、Menyuan/01/2008與A/Turkey/Wisconsin/1/1966進(jìn)化距離最近，而A/Chicken/Jiande/01/2009與A/Chicken/Zhejiang/HJ/2007進(jìn)化距離最近。系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示A/Pika/Menyuan/01/2008屬于美洲譜系，而A/Chicken/Jiande/01/2009是源自Ck/SH/F/98的重組毒株。氨基酸序列分析顯示2株病毒均有弱毒的分子特征，而雞靜脈指數(shù)(IVP