UBASH3A基因單核苷酸多態(tài)性及其mRNA水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)是一種以持續(xù)性的滑膜炎、系統(tǒng)炎癥和自身抗體(特別是類風(fēng)濕因子和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體)為特征的慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病，最終引起疼痛，關(guān)節(jié)變形和殘疾。在世界成年人口中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的患病率大約為1％。目前，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎確切的病因機(jī)制尚不清楚，致病因素多樣。有研究表明，RA的發(fā)病可能與遺傳因素、自身免疫耐受的破壞、感染因素、內(nèi)分泌異常及共同作用引起適應(yīng)性免疫和固有免疫紊亂

2、有關(guān)。近年來(lái)，從遺傳角度探索RA的發(fā)病機(jī)制成為相關(guān)研究的熱點(diǎn)。全基因組關(guān)聯(lián)研究(genome-wide association studies， GWAS)和候選基因研究已經(jīng)確定了50多個(gè)基因位點(diǎn)與RA的遺傳易感性有關(guān)，家族聚集性及雙生子研究都表明遺傳因素是RA易感性的主要決定性因素。
　　近年來(lái)，新發(fā)現(xiàn)的泛素蛋白相關(guān) SH3結(jié)構(gòu)域 A(Ubiquitin-associated and SH3 domain-containing

3、protein A， UBASH3A)作為蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein tyrosine phosphatases，PTPs)家族中的一員被人們認(rèn)識(shí)，UBASH3A也被稱為T細(xì)胞泛素配體(T-cell Ubiquitin LigAnd，TULA)或T細(xì)胞信號(hào)抑制因子2(Suppressor of T-cell Signaling2，STS-2)。UBASH3A基因主要在腎、脾、肺等器官及淋巴細(xì)胞中表達(dá)， UBASH3A蛋白包含一個(gè)

4、N-末端的與泛素相關(guān)的蛋白、Src同源3結(jié)構(gòu)域(Src Homology3，SH3)及C-末端的磷酸甘油酸變位酶結(jié)構(gòu)域(Phosphoglycerate Mutase， PGM)，如圖1所示。UBASH3A通過(guò)負(fù)調(diào)節(jié) T細(xì)胞受體介導(dǎo)的信號(hào)通路(T cell receptor，TCR)，在調(diào)控免疫反應(yīng)中具有重要作用。已有多項(xiàng)研究表明 UBASH3A基因與自身免疫性疾病的易感性相關(guān)，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和甲狀腺功能亢進(jìn)等。

5、　　目前，關(guān)于 UBASH3A在 RA的發(fā)病機(jī)制中的研究還較少，在中國(guó)漢族人群中，UBASH3A基因多態(tài)性及其外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中信使 RNA(messenger RNA, mRNA)表達(dá)與RA的關(guān)聯(lián)目前還不清楚，因此，本研究通過(guò)收集 RA病人和正常對(duì)照的血液標(biāo)本，采用病例對(duì)照研究，探討UBASH3A基因多態(tài)性與RA的疾病易感性之間的關(guān)聯(lián)；同時(shí)，檢測(cè)了P

6、BMCs中UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平，分析UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平與RA不同臨床和實(shí)驗(yàn)室特征之間的關(guān)系,并且分析UBASH3A基因多態(tài)性與 mRNA表達(dá)水平之間的關(guān)系。本研究分為2個(gè)部分。
　　研究一 UBASH3A基因多態(tài)性與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究
　　目的：比較 UBASH3A基因(rs1893592、rs2277798、rs11203203)的等位基因頻率和基因型頻率在 RA患者及對(duì)照組中的分布差異

7、，探討其與中國(guó)漢族人群 RA遺傳易感性的關(guān)系，并結(jié)合臨床資料分析其與 RA主要臨床特征和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的關(guān)系。
　　方法：本研究共納入RA患者557例，病例均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1987年修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)；健康對(duì)照954例，來(lái)自健康體檢中心。收集RA病例和對(duì)照的基本資料和臨床資料及抽取外周靜脈血，提取DNA凍存，利用Fluidigm192.24 Dynamic Array儀，采用 TaqMan探針進(jìn)行基因分型。利用SPSS11.0

8、軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　(1) UBASH3A基因3個(gè)位點(diǎn)基因型頻率分布在對(duì)照組均符合哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinverg equilibriun，HWE)定律(rs1893592：χ2=1.454，P=0.228;rs2277798：χ2=1.217, P=0.270;rs11203203：χ2=1.347, P=0.246)。
　　(2)研究結(jié)果顯示，UBASH3A基因位

9、點(diǎn)rs1893592與RA遺傳易感性有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(A versus C：χ2=19.187，P<0.001，OR=1.470，95%CI：1.237-1.748;AA+AC versus CC:χ2=11.119， P=0.001， OR=2.419，95%CI：1.439-4.066; AA versus AC+CC:χ2=7.815，P=0.005，OR=1.394，95%CI：1.104-1.760)；rs2277798位點(diǎn)及rs

10、11203203位點(diǎn)等位基因及基因型頻率在病例組和對(duì)照組中的分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　(3) UBASH3A基因rs11203203位點(diǎn)的基因型頻率在類風(fēng)濕因子(Rheumatoid Factor, RF)陽(yáng)性病例和RF陰性病例中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.011)；UBASH3A基因rs2277798位點(diǎn)的G等位基因與抗環(huán)瓜氨酸肽(Cyclic Citrullinated Peptide, CCP)抗體存

11、在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P=0.018, OR=1.642,95%CI:1.084-2.434)；未發(fā)現(xiàn)UBASH3A基因rs1893592位點(diǎn)與主要臨床特征有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P>0.05)。
　　結(jié)論 UBASH3A基因位點(diǎn) rs1893592多態(tài)性可能與 RA患病的遺傳易感性相關(guān)；rs11203203位點(diǎn)可能與RA合并RF增加有關(guān)；rs2277798可能與抗CCP抗體增加有關(guān)。提示UBASH3A基因可能增加RA的患病風(fēng)險(xiǎn)及影響其臨床表型。<

12、br>　　研究二 UBASH3A基因 mRNA水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究
　　目的：比較RA患者組和正常對(duì)照組的UBASH3A基因 mRNA表達(dá)水平的差異，分析其與RA臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)以及疾病活動(dòng)度的關(guān)聯(lián)，并分析RA患者中UBASH3A基因多態(tài)性與 mRNA表達(dá)水平之間的關(guān)系。
　　方法：在研究一的研究對(duì)象中選取30例RA患者，31例健康對(duì)照。檢測(cè) PBMCs中UBASH3A基因的mRNA表達(dá)水平。采用Mann-Whit

13、ney U秩和檢驗(yàn)比較不同組間mRNA表達(dá)水平差異，利用Spearman相關(guān)分析UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平與RA主要臨床特征之間的關(guān)系。利用SPSS11.0軟件分析數(shù)據(jù)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　(1) RA病例組PBMCs中UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平低于健康對(duì)照組mRNA表達(dá)水平(P=0.001)，各活動(dòng)組RA患者UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平與緩解期RA比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.0

14、5)。
　　(2) RF陽(yáng)性病例組UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平與RF陰性病例組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.670)；抗CCP抗體陽(yáng)性的RA病人與抗CCP抗體陰性的RA病人比較，UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.353)。
　　(3)對(duì)RA病例組UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平與血沉(Erythrocyte Sedimentation Rate, ESR)、C反應(yīng)蛋白(C-Reactiv

15、e Protein, CRP)、病程、發(fā)病年齡和疾病活動(dòng)度評(píng)分(Disease Activity Score of28 joints, DAS28)的關(guān)系采用 Spearman等級(jí)相關(guān)分析，未發(fā)現(xiàn)UBASH3A基因mRNA表達(dá)水平與ESR、CRP、病程、發(fā)病年齡和DAS28呈現(xiàn)相關(guān)性(P>0.05)。
　　(4)在 RA患者中，未發(fā)現(xiàn) UBASH3A基因多態(tài)性(rs1893592、rs11203203和rs2277798)與UBA