中國(guó)遼寧地區(qū)漢族人群PADI4-94T-C單核苷酸多態(tài)性與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病關(guān)聯(lián)性的研究.pdf

1、前言：
　　類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為特征的慢性全身自身免疫性疾病，病理上具有對(duì)稱性、進(jìn)行性及侵蝕性的多關(guān)節(jié)慢性炎癥。雖然類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的確切病因和發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但一般認(rèn)為類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是由多種遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。肽酰精氨酸脫亞胺基酶（Peptidylarginine deiminase，PADI）是精氨酸轉(zhuǎn)化為瓜氨酸過(guò)程中的關(guān)鍵酶，瓜氨酸化后的蛋白質(zhì)往往可以

2、改變其分子構(gòu)象，從而改變蛋白質(zhì)的生化活性，進(jìn)而可以參與多種生理和病理反應(yīng)。
　　近些年，許多研究者以不同國(guó)家地區(qū)的人群為基礎(chǔ)，圍繞PADI4基因rs2240340多態(tài)性與類(lèi)風(fēng)關(guān)濕節(jié)炎是否相關(guān)做了大量研究，對(duì)二者關(guān)系的認(rèn)識(shí)不斷深入，但研究結(jié)果還有一些不明確或不一致的地方，仍需進(jìn)一步探究。為了解中國(guó)漢族人群特別是遼寧地區(qū)漢族人群PADI4基因多態(tài)性與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的關(guān)聯(lián)性，本研究以200例類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和200例非類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者為研

3、究對(duì)象，進(jìn)行了病例對(duì)照研究，將可能影響類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的因素進(jìn)行了單因素分析，確定其危險(xiǎn)因素后，進(jìn)一步運(yùn)用叉生分析，將其分別與PADI4-94基因型進(jìn)行交互作用分析，為類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生機(jī)制的遺傳基因證據(jù)提供了可能性，也為制定防治措施提供了依據(jù)。
　　對(duì)象與方法：
　　一、研究對(duì)象的選擇
　　病例組是沈陽(yáng)市某醫(yī)院的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者200例，均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，在沈陽(yáng)市某醫(yī)院體檢中心，連續(xù)收集200例非類(lèi)風(fēng)

4、濕關(guān)節(jié)炎患者作為對(duì)照組，并保證病例組和對(duì)照組例數(shù)相等且非匹配設(shè)計(jì)，對(duì)照組人群均經(jīng)過(guò)血清類(lèi)風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，Rf)和抗核抗體(antinudear antibody，ANA)檢測(cè)，且結(jié)果均為陰性，并無(wú)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn)，已確定為非類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者。所有研究對(duì)象均在遼寧省居住5年以上且無(wú)血緣關(guān)系的漢族人群，排除結(jié)締組織病和關(guān)節(jié)性疾病。所有臨床和實(shí)驗(yàn)室資料的收集以及外周血樣的采集均獲得研究對(duì)象的知情同意，簽知情同

5、意書(shū)。
　　二、調(diào)查內(nèi)容
　　(1)研究對(duì)象的年齡、身高、體重、學(xué)歷等一般情況。
　　(2)研究對(duì)象是否攝入奶制品、每周吃鈣片的量、是否每周吃豆制品、是否每周吃海產(chǎn)品等飲食狀況，是否飲酒、吸煙等。
　　(3)研究對(duì)象是否有肝炎、糖尿病、高血壓、缺血性心臟病、消化道潰瘍，是否有過(guò)敏等疾病史。
　　三、診斷標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)量方法
　　診斷標(biāo)準(zhǔn):所有患者均符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(American Colleg

6、e ofRheumatology，ACR)的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[5]。診斷標(biāo)準(zhǔn)為:(1)晨僵至少1h（持續(xù)＞6w）;(2)3個(gè)或以上關(guān)節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(3)腕、掌指關(guān)節(jié)或近端指間關(guān)節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(4)對(duì)稱性關(guān)節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(5)皮下結(jié)節(jié);(6)手X線平片改變;(7)類(lèi)風(fēng)濕因子滴度＞1∶32。符合上述標(biāo)準(zhǔn)4項(xiàng)及以上即診斷為類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。
　　四、實(shí)驗(yàn)室檢查
　　血標(biāo)本采集:所有研究對(duì)象均于清晨空腹抽取靜脈血5

7、mL，0.2％ EDTA-Na2抗凝，2℃～8℃保存，72 h內(nèi)提取外周血DNA。
　　DNA的提取:取樣本的全血5 ml，用Qiagen公司的DNA提取試劑盒提取基因組DNA，-70℃凍存待用。
　　-LDR法檢測(cè)方法:主要應(yīng)用連接酶檢測(cè)反應(yīng)(ligase detection reaction，LDR)技術(shù)。
　　五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　用Excel建立數(shù)據(jù)，兩人進(jìn)行數(shù)據(jù)的錄入和核查比對(duì)，運(yùn)用SPSS16.0軟件分

8、析，統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性水平為α=0.05，根據(jù)不同的情況采用不同的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行描述分析，用Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)群體代表性，不同基因型及等位基因頻率比較均采用x2檢驗(yàn)，OR值及其95％可信區(qū)間表示。進(jìn)行單因素分析后，再用多因素非條件Logistic回歸分析，環(huán)境因素與基因交互作用的分析運(yùn)用叉生分析進(jìn)行。
　　結(jié)果：
　　PADI4-94基因位點(diǎn)的等位基因頻率在對(duì)照組中的分布符合Hardy-Weinberg平

9、衡(P＞0.05)。PADI4-94基因位點(diǎn)的基因型、等位基因頻率，在病例組與對(duì)照組人群中的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本組研究按不同性別分層比較發(fā)現(xiàn)，PADI4-94基因位點(diǎn)在對(duì)照組與病例組的男女性間分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。單因素分析結(jié)果顯示，BMI、腹型肥胖、住宅情況、有無(wú)取暖、通風(fēng)受冷、飲食是否規(guī)律、食用豆制品、食用海產(chǎn)品、是否得過(guò)肝炎和過(guò)敏在病例組與對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);學(xué)歷、基因型、

10、住宅有無(wú)電梯、是否飲用牛奶、是否服用鈣片、是否飲酒、是否吸煙、是否得過(guò)糖尿病、是否得過(guò)高血壓、是否得過(guò)心臟病在病例組與對(duì)照組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。多因素非條件Logistic回歸分析顯示，在校正其他因素的影響后，最終進(jìn)入回歸方程的5個(gè)影響因素分別為BMI、腹型肥胖、住宅情況、取暖、通風(fēng)受冷(P＜0.05)。PADI4-94基因位點(diǎn)的基因型分別與BMI、腹型肥胖、通風(fēng)受冷進(jìn)行交叉分析顯示均有交互作用。
　　討論：<

11、br>　　一、PADI4-94基因易感性分析
　　比較兩組等位基因頻率對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎易感性的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;比較兩組的該位點(diǎn)基因型對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的危險(xiǎn)性沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示含有TC和CC的個(gè)體患類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的易感性未見(jiàn)升高，表明PADI4-94基因與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病沒(méi)有關(guān)聯(lián)。
　　二、危險(xiǎn)因素和PADI4基因型在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生中的交互作用
　　本次研究超重組和肥胖組為一個(gè)因素，研究結(jié)果表明其超重和肥胖是類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

12、發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素，同時(shí)腹型肥胖也是危險(xiǎn)因素。出現(xiàn)協(xié)同作用，可能是因?yàn)橹炯?xì)胞作為一種內(nèi)分泌細(xì)胞可以分泌出多種脂肪因子，這種因子可能易發(fā)炎癥反應(yīng)，一旦發(fā)生炎癥反應(yīng)，就可以導(dǎo)致含PADI4細(xì)胞死亡，細(xì)胞內(nèi)的鈣濃度達(dá)到一定的濃度，就可以活化PADI4，進(jìn)而瓜氨酸化，瓜氨酸化后的蛋白質(zhì)往往可以改變其分子構(gòu)象，從而改變蛋白質(zhì)的生化活性，進(jìn)而可以參與多種生理和病理反應(yīng)。肥胖人群有較多脂肪細(xì)胞，更能促使類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。
　　本次研究顯示通

13、風(fēng)受冷是類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病的危險(xiǎn)因素，通風(fēng)則容易受冷，受冷的人群可能發(fā)生類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎危險(xiǎn)性比正常人高。可能是因?yàn)楹渥鳛榇碳ひ蜃?，迫使人體的免疫系統(tǒng)做出相應(yīng)調(diào)節(jié)抵制該刺激，免疫系統(tǒng)容易被破壞，也容易促發(fā)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生。在相加效應(yīng)模型中，呈現(xiàn)協(xié)同作用，寒冷是不良的環(huán)境因素，降低人體免疫力，容易誘發(fā)一些致病因子，導(dǎo)致類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。
　　結(jié)論：
　　1.提示PADI4-94T/C位點(diǎn)基因多態(tài)性與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病可能無(wú)關(guān)聯(lián)性。