PTSD狀態(tài)下GLT-1-NR2B調(diào)控內(nèi)臟高敏感性-中樞痛覺(jué)敏化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的:
　　創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(PTSD)是指遭受嚴(yán)重身體或心理創(chuàng)傷后出現(xiàn)的精神心理障礙綜合征。近年來(lái)隨著自然災(zāi)害、社會(huì)暴力、工作生活壓力的不斷增多，PTSD的發(fā)病率呈逐年增高趨勢(shì)。既往文獻(xiàn)報(bào)道，在PTSD應(yīng)激狀態(tài)下存在著廣泛的內(nèi)臟敏感性改變—中樞痛覺(jué)敏化/去敏化現(xiàn)象，而內(nèi)臟高敏感是功能性胃腸病(FGIDs)如腸易激綜合征(IBS)最主要的發(fā)病機(jī)制之一，PTSD與IBS之間互為因果、相互促進(jìn)彼此的發(fā)生。目前PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟高敏

2、感性—中樞痛覺(jué)敏化的確切分子機(jī)制尚不清楚，既往研究主要集中在大腦的海馬、杏仁核、前扣帶回等部位，而目前有證據(jù)表明脊髓水平中樞痛覺(jué)敏化亦發(fā)揮了重要作用，并逐漸成為了研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)課題。
　　谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，通過(guò)激活谷氨酸受體發(fā)揮傷害性信息傳遞作用。N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體2B(NR2B)亞基被谷氨酸激活后參與了多種疼痛的形成與維持。既往有學(xué)者利用內(nèi)臟痛、炎性痛、神經(jīng)痛大鼠模型，均證

3、實(shí)NR2B在脊髓水平參與了痛覺(jué)敏化的調(diào)控。由于神經(jīng)細(xì)胞突觸間隙缺乏谷氨酸代謝酶，CNS中的谷氨酸主要依賴谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1(GLT-1)清除。在中樞痛覺(jué)敏化下，GLT-1對(duì)谷氨酸的攝取活性降低。頭孢曲松(CTX)作為一種β-內(nèi)酰胺類抗生素，可選擇性誘發(fā)GLT-1的基因轉(zhuǎn)錄，上調(diào)GLT-1的表達(dá)，從而發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性作用。
　　NR2B、GLT-1分別作為谷氨酸能系統(tǒng)的重要組成部分，兩者之間有著密切的聯(lián)系，GLT-1可通過(guò)調(diào)控突觸間隙

4、谷氨酸的含量影響NR2B的表達(dá)，兩者共同在中樞疼痛信息傳遞中發(fā)揮了重要作用。我們推測(cè)，在脊髓水平GLT-1、NR2B共同參與了PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟敏感性—中樞痛覺(jué)敏化的形成，CTX可以通過(guò)調(diào)控GLT-1/NR2B的表達(dá)發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性作用，為PTSD內(nèi)臟高敏感關(guān)聯(lián)疾病的臨床防治提供了新思路。
　　實(shí)驗(yàn)一 PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟敏感性的改變及CTX抗內(nèi)臟傷害性刺激作用
　　方法:
　　選用成年雌性Sprague-Dwley大鼠

5、35只，隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組(7只):腹腔注射生理鹽水;PTSD組（7只）:即采用卵清蛋白(OVA)基礎(chǔ)致敏聯(lián)合單一連續(xù)應(yīng)激(SPS)制作PTSD內(nèi)臟高敏感大鼠模型;CTX組（7只）:腹腔內(nèi)注射CTX(200mg/kg)預(yù)處理，連續(xù)7天;PTSD+CTX組（7只）:即OVA基礎(chǔ)致敏聯(lián)合SPS應(yīng)激，并在SPS應(yīng)激后立即給予CTX(200mg/kg)預(yù)處理，連續(xù)7天;PTSD+ CTX+ DHK組（7只）:處理同PTSD+ CTX組，結(jié)

6、直腸擴(kuò)張(CRD)之前1小時(shí)給予腹腔注射DHK(10 mg/kg)。
　　采用CRD-內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)反射(VRM)技術(shù)檢測(cè)內(nèi)臟敏感性的改變:大鼠腹外斜肌埋置電極，在20、40、60、80 mmHg梯度壓力行CRD，記錄CRD-VRM后的腹外斜肌肌電圖(EMG)，通過(guò)計(jì)算EMG曲線下面積(AUC)評(píng)估PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟敏感性改變。
　　結(jié)果:
　　在20、40、60、80 mmHg各梯度壓力下行CRD， PTSD組的AUC均顯

7、著高于正常對(duì)照組（P值均＜0.05）;與PTSD組比較，PTSD+CTX組在各壓力水平的AUC明顯降低(P值均＜0.01）;在80mmHg行CRD，GLT-1抑制劑DHK可逆轉(zhuǎn)CTX的抗內(nèi)臟傷害作用(P＜0.05)。在40、60、80 mmHg下行CRD時(shí)，CTX組的AUC明顯低于正常對(duì)照組（P值均＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　腹腔注射OVA基礎(chǔ)致敏聯(lián)合SPS可成功建立PTSD內(nèi)臟高敏感大鼠模型，PTSD誘導(dǎo)了內(nèi)臟高敏感的

8、發(fā)生;在PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下，CTX能夠發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性作用;給予GLT-1特異性抑制劑DHK可逆轉(zhuǎn)CTX的抗內(nèi)臟傷害作用。
　　實(shí)驗(yàn)二 PTSD狀態(tài)下脊髓GLT-1表達(dá)的改變及CTX干預(yù)的影響
　　方法:
　　選用成年雌性Sprague-Dwley大鼠42只，隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組（8只）、PTSD組（9只）、CTX組（8只）、PTSD+CTX組(10只)、 PTSD+CTX+DHK組（7只），模型建立同實(shí)驗(yàn)一

9、。
　　采用免疫熒光漂染技術(shù)及激光共聚焦顯微技術(shù)研究各組大鼠脊髓GLT-1的表達(dá)水平變化:測(cè)量各組大鼠脊髓GLT-1的免疫熒光平均光密度值(AOD)，表示脊髓GLT-1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　與正常對(duì)照組比較，CTX組脊髓GLT-1表達(dá)水平顯著增高(P=0.001)，而PTSD組GLT-1表達(dá)較正常對(duì)照組比較明顯降低(P=0.001); PTSD+CTX組脊髓GLT-1表達(dá)水平與PTSD組比較顯著增高(P=0.0

10、04);PTSD+ CTX組分別與正常對(duì)照組、PTSD+CTX+ DHK組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　小結(jié):
　　PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下GLT-1表達(dá)明顯下調(diào)，但CTX可上調(diào)脊髓GLT-1的表達(dá)，從而提示在脊髓水平，GLT-1參與了PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟高敏感性—中樞痛覺(jué)敏化的形成。
　　實(shí)驗(yàn)三 PTSD狀態(tài)下CTX通過(guò)影響NR2B的表達(dá)發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性作用的機(jī)制
　　方法:
　　選用成年雌性Spragu

11、e-Dwley大鼠35只，隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組（7只）、PTSD組（7只）、PTSD+CTX組（7只），模型建立同第一部分。
　　采用免疫熒光漂染技術(shù)及激光共聚焦顯微技術(shù)，測(cè)量各組大鼠脊髓NR2B的AOD值，觀察脊髓NR2B表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　　與正常對(duì)照組比較，PTSD組脊髓NR2B表達(dá)顯著增高(P=0.001）;與PTSD組比較，PTSD+CTX組NR2B表達(dá)顯著降低(P=0.001)。PTSD+C

12、TX組與正常對(duì)照組比較NR2B表達(dá)無(wú)明顯差異(P＞0.05）。
　　小結(jié):
　　在PTSD狀態(tài)下，NR2B表達(dá)明顯上調(diào)，CTX可下調(diào)NR2B的表達(dá)，提示NR2B參與PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟高敏感性—中樞痛覺(jué)敏化的調(diào)控作用,CTX可能通過(guò)影響NR2B的表達(dá)發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性效應(yīng)。
　　結(jié)論:
　　1.腹腔注射OVA基礎(chǔ)致敏聯(lián)合SPS可成功建立PTSD內(nèi)臟高敏感大鼠模型，PTSD誘導(dǎo)了內(nèi)臟高敏感性。
　　2.在PTSD