miR-320靶向FOXM1調(diào)控結(jié)腸癌化放療敏感性的機(jī)制研究.pdf

1、1分類號：密級：UDC：學(xué)號：406521612525南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文miR320靶向靶向FOXM1調(diào)控結(jié)腸癌化放療敏感性的機(jī)制研究調(diào)控結(jié)腸癌化放療敏感性的機(jī)制研究miR320enhancesthesensitivityofhumancoloncancercellstochemadiotherapyinvitrobytargetingFOXM1萬璐穎萬璐穎培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：熊建萍教授申

2、請學(xué)位的學(xué)科門類：臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：腫瘤學(xué)論文答辯日期：2015年6月答辯委員會主席：徐方云評閱人：吳建兵周榮偉2015年6月摘要II摘要摘要目的：目的：探討miR320對人結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為、5FU和奧沙利鉑化療耐藥及放射線抵抗的影響，并初步闡明miR320逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌細(xì)胞耐藥及放療抵抗的機(jī)制。方法：方法：1.選擇miR320相對低表達(dá)的HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞及miR320相對高表達(dá)的HT29細(xì)胞，分別轉(zhuǎn)染miR320mimic

3、s及miR320inhibit，并各自轉(zhuǎn)染無義序列NC為對照組。采用實時定量PCR方法檢測結(jié)腸癌細(xì)胞miR320表達(dá)變化。2.采用MTT法、克隆形成試驗檢測轉(zhuǎn)染后四組結(jié)腸癌細(xì)胞（HCT116mimics、HCT116NC、HT29inhibit、HT29NC）的增殖能力；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測四組結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期；采用Transwell實驗檢測四組結(jié)腸癌細(xì)胞遷移及侵襲能力。MTT法檢測5FU和奧沙利鉑對四組細(xì)胞的抑制率并計算IC50

4、值。MTT法檢測經(jīng)放射線處理后的細(xì)胞活性。3.采用雙熒光素酶報告基因試驗驗證miR320是否可與FOXM13’UTR靶向結(jié)合。RTPCR技術(shù)檢測miR320對FOXM1mRNA表達(dá)水平的影響。Westernblot技術(shù)檢測miR320對FOXM1、βcatenin、CyclinD1、cmyc蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果：結(jié)果：1.RTPCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后miR320表達(dá)水平在HCT116mimics組細(xì)胞較HCT116NC組細(xì)胞明顯升高；

5、HT29inhibit組則較HT29NC組明顯下降。2.上調(diào)miR320明顯抑制HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及克隆形成能力，抑制細(xì)胞周期進(jìn)展，抑制細(xì)胞遷移及侵襲，并增強(qiáng)細(xì)胞對5FU、奧沙利鉑及放射線的敏感性，但不影響細(xì)胞凋亡率；下調(diào)miR320則增強(qiáng)HT29結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及克隆形成能力，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展，增強(qiáng)細(xì)胞遷移及侵襲能力，并降低細(xì)胞對5FU、奧沙利鉑及放射線的敏感性，但不影響細(xì)胞凋亡率。3.雙熒光素酶報告基因試驗中，共轉(zhuǎn)染miR32