2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  本研究通過體外細胞實驗探討ERK抑制劑PD98059是否提高結腸癌細胞HT-29對RTX(雷替曲塞)的敏感性,并對其中的相關作用特點及機制進行深入研究,為結腸癌的臨床治療提供可靠的實驗數據支持。
  方法:
  1、培養(yǎng)人結腸癌細胞HT-29,待培養(yǎng)至對數生長期時進行傳代種板,細胞貼壁后按不同處理因素進行分組:對照組、單純RTX組、單純PD98059組及聯合用藥組。
  2、各處理組細胞在作用24h后

2、于普通光學倒置顯微鏡下觀察各組的細胞生長狀態(tài)及形態(tài)學改變。
  3、使用MTT法及細胞計數法分別檢測各實驗組的細胞被處理24h后的細胞增殖活力。
  4、采用流式細胞儀法檢測被處理24h后的各實驗組細胞的凋亡率是否出現差異。
  5、各試驗組細胞被處理8h后,將每組的細胞總蛋白提取,使用western blot法檢測各組細胞中Ras、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的相對表達量。
  6、在無菌無酶狀態(tài)下提取出

3、各試驗組細胞的總RNA,反轉錄得到K-Ras、ERK1、ERK2基因的cDNA后,通過實時熒光定量PCR法檢測各組相關基因的相對表達量。
  結果:
  1、倒置顯微鏡下觀察可見與對照組相比,單純PD98059組形態(tài)及數量變化不明顯,而單純RTX組與聯合用藥組細胞數量均明顯減少,并可見核碎裂、凋亡小體等典型細胞凋亡形態(tài)學變化,且聯合用藥組的細胞數量及形態(tài)學變化程度比其他各組更明顯。
  2、MTT法及細胞計數法結果發(fā)現

4、相比于對照組,單純PD98059組細胞增殖率未出現明顯變化,而單純RTX組與聯合用藥組的細胞增殖活力均降低,且聯合用藥組的細胞增殖率的降低程度最深。
  3、流式細胞儀檢測細胞凋亡率變化方面,可見與對照組相比各實驗組的細胞凋亡率均明顯升高,且聯合用藥組的細胞凋亡趨勢最顯著。
  4、western blot法檢測細胞相關蛋白的表達量時可見與對照組相比,單純PD98059組細胞的Ras、ERK1/2蛋白表達無明顯變化,p-ER

5、K1/2蛋白表達下調;單純RTX組細胞的ERK1/2、Ras、p-ERK1/2蛋白表達無明顯差異;聯合用藥組細胞的Ras、ERK1/2蛋白表達均無明顯變化,p-ERK1/2蛋白表達均下調。
  5、RT-PCR結果表示各實驗組相比于對照組在ERK1、ERK2、K-Ras mRNA的表達上均未表現出明顯的差異(即P>0.05)。
  結論:
  1、RTX對結腸癌細胞HT-29具有抑制增殖及促進凋亡作用。
  2、

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