應用液質聯用技術測定大鼠血漿中左旋多巴、MD01及其藥代動力學研究.pdf

1、貓豆是豆科藜豆屬植物龍爪藜豆（Mucuna pruriens var.utilis Burck）的種子，其中含有大量的左旋多巴（4-7％），是一種被廣泛用于治療帕金森病的傳統(tǒng)藥材。與傳統(tǒng)左旋多巴制劑相比，貓豆提取物（MPE）在長期治療帕金森病過程中不會造成異動癥等副作用。除左旋多巴外，貓豆中還含有其衍生物，如包括1,1-二甲基-3-羧基-6,7-二羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉（MD01）在內的簡單異喹啉類氨基酸類微量成分。本論文建立

2、了同時測定大鼠血漿中左旋多巴及MD01的可靠、靈敏的液質聯用檢測方法，并應用于大鼠單次及多次灌胃給予左旋多巴、MPE及左旋多巴/MD01后的藥代動力學研究，為闡明貓豆中含有的其它成分是否對左旋多巴藥代動力學特征產生影響提供數據參考。
　　在LC-MS/MS分析方法開發(fā)中，對質譜方法、色譜方法、樣品處理方法及穩(wěn)定劑條件等方面進行了優(yōu)化。質譜檢測采用電噴霧離子源（ESI）正離子模式多反應檢測（MRM）方法，左旋多巴、MD01及內標甲基

3、多巴的監(jiān)測離子對分別為m/z198.1→135.0、m/z238.3→175.2及m/z212.1→139.0。為解決其基質效應導致的離子抑制，對色譜條件及樣品提取條件進行了系統(tǒng)的優(yōu)化，最終選用Thermo Aquasil C18色譜柱(50×2.1mm，3μm)，乙腈及0.2%甲酸水溶液作為流動相，以0.6mL/min流速進行梯度洗脫，在得到理想保留的情況下將基質效應的影響降低。由于化合物存在蛋白結合現象，使用純乙腈沉淀時回收率不理想

4、，通過優(yōu)化最終選用2%甲酸乙腈進行蛋白沉淀以獲得較好的提取回收率。左旋多巴及MD01容易氧化降解，因此利用抗氧化劑焦亞硫酸鈉使其在純溶液及基質中保持穩(wěn)定。本方法線性范圍為20.0-10000ng/mL，分析時間短（3.5min），具有較好的準確度（RE-9.7%~10.8%）及批內、批間精密度（RSD≤12.3%）。
　　該方法經完整驗證后運用于單次及多次灌胃給予左旋多巴、MPE、左旋多巴/MD01后的大鼠血漿中左旋多巴檢測。其藥

5、代動力學結果顯示：在同等劑量下單次灌胃給藥后的各組間差異并不明顯，與左旋多巴給藥組相比，MPE給藥組及左旋多巴/MD01給藥組僅在平均滯留時間（MRT）上有所提高；而在連續(xù)給予MPE408mg/kg7天后，左旋多巴的AUC(0-∞)為641405±81451ng.min/mL，與連續(xù)給予左旋多巴單體（AUC(0-∞)：416824±109850ng.min/mL）相比有明顯升高。該研究結果揭示，采用MPE多次給藥時的主要藥效成分左旋多巴