馬、驢、人、恒河猴四種屬Tetherin蛋白對(duì)馬傳染性貧血病毒抑制作用的研究.pdf

1、通過(guò)人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)的研究中發(fā)現(xiàn)，宿主細(xì)胞天然存在先天免疫因子，對(duì)病毒的侵入、復(fù)制和出芽存在限制作用。這些因子被稱為“宿主限制因子”，參與先天性免疫反應(yīng)，干擾病毒生命周期的不同階段。目前有四大類限制因子:APOBEC3G(apolipoprotein B mRNAediting enzyme3G)、Trim5α(tripartite motif protein5α)、Te

2、therin(也被稱做BST-2，CD317，or HM1.24)、SAMHD1(sterileαmotif domain and HDdomain-containing protein1)。這些限制因子可有效地限制逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，是宿主抵抗病毒感染的一個(gè)重要防御屏障。Tetherin能阻止新生逆轉(zhuǎn)錄病毒及其它囊膜病毒從感染細(xì)胞表面釋放而發(fā)揮抗病毒效應(yīng)。本研究主要針對(duì)天然免疫因子Tetherin與逆轉(zhuǎn)錄病毒EIAV之間的相互作用進(jìn)行研究

3、。首次克隆了馬屬動(dòng)物的Tetherin基因，并對(duì)其編碼的蛋白進(jìn)行了抗病活性研究。將馬、驢、人、恒河猴四種Tetherin基因分別插入真核表達(dá)載體pEF4/myc-His B，得到重組質(zhì)粒pHF-eq.Tetherin、pHF-don.Tetherin、pHF-hu.Tetherin、pHF-mac.Tetherin。將四種Tetherin重組質(zhì)粒分別與EIAV假病毒粒子感染性質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞和Hela細(xì)胞，采用WesternBlo

4、t與激光共聚焦方法檢測(cè)Tetherin對(duì)EIAV出芽的限制作用。研究結(jié)果表明，四種Tetherin均能夠有效的抑制EIAV假病毒粒子的釋放，并且Tetherin與EIAV均定位于細(xì)胞膜上。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Tetherin獨(dú)特的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)有直接關(guān)系，Tetherin是獨(dú)特的細(xì)胞表面膜蛋白，由N端胞質(zhì)區(qū)尾區(qū)(Cytoplasmic tail，CT)、跨膜區(qū)(trans-membrane，TM)、胞外區(qū)(ectodomain，ED)和C端糖基磷脂酰肌

5、醇(glycosylphosphatidylinositol，GPI)四部分組成。由于同時(shí)具有GPI錨定點(diǎn)和跨膜區(qū)的這種不尋常的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，使病毒粒子牢固地附著于感染細(xì)胞的表面，從而阻止病毒的擴(kuò)散。
　　 馬傳染性貧血病毒(Equine infectious anemia virus，EIAV)在基因組結(jié)構(gòu)和抗原性上與人艾滋病病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)十分相似，是逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬家