馬傳染性貧血病毒LTR嵌合克隆生物學(xué)特性的研究.pdf

1、本文為了揭示我國(guó)馬傳貧弱毒疫苗毒力致弱及免疫保護(hù)的分子機(jī)制，為人免疫缺陷病毒及其它慢病毒的免疫預(yù)防提供借鑒，利用我國(guó)擁有的馬傳染性貧血病毒疫苗培育系統(tǒng)(由強(qiáng)毒到弱毒的不同代次病毒)，對(duì)EIAV弱毒疫苗致弱過(guò)程中EIAV非編碼區(qū)LTR進(jìn)行了序列分析，將病毒致弱的基因變異位點(diǎn)鎖定在有限范圍之內(nèi)。 本試驗(yàn)基于代次毒分析結(jié)果，選取LTR變異率較高的U3區(qū)，以驢胎皮膚弱毒疫苗感染性分子克隆株pLGFD3-8和驢強(qiáng)毒株感染性分子克隆株為父本

2、操作系統(tǒng)進(jìn)行基因替換，構(gòu)建EIAV非編碼區(qū)強(qiáng)弱毒嵌合的全基因分子克隆，將陽(yáng)性重組質(zhì)粒命名為pLGFD9-12。將該嵌合克隆體外轉(zhuǎn)染驢胎皮膚細(xì)胞(FDD)并以驢白細(xì)胞(DL)傳代，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶活性試驗(yàn)、前病毒DNAPCR擴(kuò)增、RT-PCR方法及實(shí)時(shí)定量RT-PCR等試驗(yàn)驗(yàn)證其轉(zhuǎn)染結(jié)果。結(jié)果顯示，LTR嵌合克隆衍生病毒感染FDD和DL細(xì)胞均出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變，電鏡下可見(jiàn)大量典型的EIAV顆粒，將其病毒命名為vLGFD9-12；細(xì)胞培養(yǎng)上清可

3、檢測(cè)到RT酶活性；前病毒DNAPCR擴(kuò)增和RT-PCR均為陽(yáng)性。在細(xì)胞水平上對(duì)該嵌合克隆衍生毒及其親本感染性分子克隆毒株復(fù)制能力進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)此嵌合克隆衍生病毒與其父本克隆衍生病毒具有相似的復(fù)制水平，此嵌合克隆衍生病毒在DL細(xì)胞上復(fù)制水平略高于FDD細(xì)胞，保持了親本皮膚弱毒疫苗感染分子克隆的復(fù)制特點(diǎn)和細(xì)胞嗜性。同時(shí)也說(shuō)明E-box基序和GATA基序的改變并沒(méi)有引起LTR對(duì)病毒復(fù)制和細(xì)胞嗜性的影響?！　”卷?xiàng)研究為進(jìn)一步確定我國(guó)馬傳貧弱