RIP3蛋白多肽配體體外活性測試的研究.pdf

1、細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡之間的動態(tài)平衡對于生物體的發(fā)育和維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)起著至關(guān)重要的作用，一旦這種平衡被打破，就會導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常、癌癥、自身免疫性疾病和退行性疾病。細(xì)胞凋亡是生理情況下最主要的程序性死亡方式，其發(fā)生具有許多積極的生物學(xué)意義。而細(xì)胞壞死在之前則被認(rèn)為是發(fā)生在一系列不同的生理或病理條件下的被動性細(xì)胞死亡，但是越來越多的研究發(fā)現(xiàn)[3]，某些細(xì)胞壞死不是被動的、無組織的過程，是受基因調(diào)控的。從機(jī)體水平來看，細(xì)胞壞死常常發(fā)生于許多不

2、同的生理或病理狀況。如今，細(xì)胞壞死被報道發(fā)生于一些生理過程，如免疫抵御，還參與很多疾病的發(fā)生，如急性胰腺炎、內(nèi)毒素誘導(dǎo)的休克、缺血性心腦血管疾病、動脈粥樣硬化等[15]。值得關(guān)注的是，RIP3蛋白是誘導(dǎo)細(xì)胞壞死途徑的關(guān)鍵調(diào)控蛋白，因此本課題選用RIP3蛋白作為靶點。RIP3的C-端有一段特殊的序列-RHIM結(jié)構(gòu)域（RIP homotypic interaction motif，RHIM），除RIP3外，RHIM結(jié)構(gòu)域還存在于RIP1、T

3、RIF、DAI等蛋白中，這個功能域是RIP3與RIP1等蛋白發(fā)生相互作用所必需的。另外，有研究表明[1]，在RHIM結(jié)構(gòu)域中，有四個關(guān)鍵氨基酸是高度保守的，當(dāng)它們突變?yōu)锳la時，則會影響RIP3與RIP1的相互作用。本課題通過固相合成法合成多肽，反相高效液相色譜提純多肽，基質(zhì)輔助激光解吸-飛行時間質(zhì)譜鑒定多肽并最終采用熒光偏振的方法研究不同多肽配體（hTRIF、hRIP1、muRIP1、amRIP1、rnRIP1、hRIP3、muRIP

4、3、hDAI1、hDA12）在體外與RIP3蛋白的結(jié)合能力。多肽與蛋白的結(jié)合曲線表明：多肽hRIP3與RIP3蛋白結(jié)合最強(qiáng)，而多肽muRIP3幾乎不與蛋白相互作用；RHIM結(jié)構(gòu)域的四個關(guān)鍵氨基酸及其周圍的氨基酸殘基都會影響多肽與蛋白的相互作用，當(dāng)RHIM結(jié)構(gòu)域的四個關(guān)鍵氨基酸相同且多肽與蛋白結(jié)合較強(qiáng)時，周圍的氨基酸殘基的影響不顯著，但如果與蛋白結(jié)合較弱時，周圍的氨基酸殘基影響較為明顯。通過多肽配體與RIP3蛋白相互作用，進(jìn)一步在細(xì)胞或動