滸苔多糖的降解、硒化及其體外活性研究.pdf

1、滸苔（Enteromorpha）是一種資源豐富的經(jīng)濟海藻，其中含有較多的水溶性硫酸多糖，即滸苔多糖，具有多種生物活性。但多糖的高分子量影響其活性的發(fā)揮，本文對提取的滸苔多糖進行降解研究，獲得具有更高生物活性的降解滸苔多糖單體，并對降解滸苔多糖進行硒化修飾，制備硒化降解滸苔多糖單體，兼具硒和降解滸苔多糖的多種生理和藥理功能。本文由三部分組成。
　　第一部分研究了滸苔多糖的提取、純化以及硒化修飾。
　　利用熱水法提取滸苔多糖，經(jīng)

2、醇沉、透析、純化，得到滸苔多糖 EP。醇沉后測得總糖含量56.30％，收率27.59%。含蛋白質(zhì)0.726%，糖醛酸13.01%，硫酸根18.46%。用亞硒酸鈉對滸苔多糖進行硒化修飾，制備了滸苔硒多糖（Se-EP），硒含量493.5μg/g，得率41.2%。采用DEAE-52纖維素柱層析對EP、Se-EP進行分級，各得到5個單體。通過紅外光譜表明形成了新的化學鍵，即亞硒酸酯基團。
　　第二部分分別采用自由基法、微波輔助鹽酸-過氧化

3、氫法降解滸苔多糖，并進行硒化修飾。
　　采用自由基法和微波輔助鹽酸/過氧化氫法兩種方法對滸苔多糖進行降解，以樣品對羥自由基的清除率為指標，得出自由基法最優(yōu)降解工藝為：H2O2+Vc（1:1）濃度15 mmol/L、溫度50℃、反應時間2 h、料液比1:50（g/mL），降解滸苔多糖得率58.33%，·OH清除率64.71%，降解前后的滸苔多糖的·OH清除率IC50分別為1.237 mg/mL和0.334 mg/mL，平均相對分子質(zhì)

4、量由84.02 KDa降為53.78 KDa；微波輔助鹽酸過氧化氫法最優(yōu)降解工藝為：反應時間10 min、反應溫度50℃、微波功率900W、30%過氧化氫加入量5%。反應過程中，鹽酸的體積分數(shù)為8.4%。降解滸苔多糖得率為77.88%，對·OH清除率達61.51%。降解前后，滸苔多糖對·OH清除率的IC50分別為1.237 mg/mL和0.348 mg/mL，滸苔多糖的M——w=84.02 KDa,降解滸苔多糖的M——w=53.59 K

5、Da。降解滸苔多糖的抗氧化活性明顯高于未降解滸苔多糖。通過IR、NMR分析，滸苔多糖降解前后的單糖組成均為α-D-葡萄吡喃糖，且降解后多糖的基本結(jié)構(gòu)和活性基團沒有被破壞。
　　對兩種降解方法所得到的降解多糖LEP1、LEP2進行硒化，分別制備了降解滸苔硒多糖Se-LEP1、Se-LEP2，硒含量分別為1137.29μg/g和1234.77μg/g；得率分別為57.6%、66.2%。采用DEAE-52纖維素柱層析對多糖進行分級，LE

6、P1、Se-LEP1得到6個單體，LEP2、Se-LEP2得到5個單體。
　　第三部分探討了滸苔多糖、滸苔硒多糖、降解滸苔多糖、降解滸苔硒多糖的初步結(jié)構(gòu)表征、硫酸根含量測定、體外抗氧化活性、抑菌活性和對益生菌-植物乳桿菌的益生作用。
　　對六種多糖硫酸根含量測定顯示，EP、Se-EP、LEP1、Se-LEP1、LEP2、Se-LEP2的硫酸根含量分別為22.44%、22.82%、22.84%、22.96%、22.71%、22

7、.87%，無論是硒化前后，還是降解前后，硫酸根含量基本不變，仍然保持其生理作用。
　　六種多糖均具有一定的清除自由基DPPH、·OH的作用，具有一定的抗氧化活性，且在實驗濃度范圍內(nèi)，清除率呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
　　用96孔板法研究六種滸苔多糖對蘋果腐爛病菌、蘋果炭疽病菌、棉花枯萎、柑橘炭疽病菌與白菜黑斑病菌的抑菌效果，經(jīng)過實驗測得Se-LEP2對蘋果腐爛病菌、蘋果炭疽病菌、白菜黑斑病菌具有一定的抑菌效果， MIC均為25 m

8、g/mL， LEP1、LEP2、Se-EP、Se-LEP1、Se-LEP2對蘋果炭疽病菌具有一定的抑菌效果， MIC分別為12.5、6.25、25、25、25 mg/mL。對大腸桿菌、短小芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、沙門氏菌、藤黃微球菌的抑菌效果顯示，Se-LEP1對大腸、枯草、沙門桿菌的MIC分別為50、25、25 mg/mL，Se-LEP2的MIC分別為25、25、12.5 mg/mL，此外，EP對大腸桿菌MIC為50 mg