結(jié)直腸癌中RIP3基因的表達(dá)及其功能研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在探討RIP3基因在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系，并進(jìn)一步探查其在結(jié)直腸癌細(xì)胞中發(fā)揮的功能，有助于揭示結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法:
　　1.采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR（Real-time PCR）、蛋白印記法（Western blot）檢測(cè)RIP3在結(jié)直腸癌組織及其配對(duì)正常膜黏組織中mRNA及蛋白表達(dá)差異。
　　2.采用免疫組織化學(xué)（Immunohistoch

2、emistry）檢測(cè)結(jié)直腸癌及其配對(duì)正常黏膜組織RIP3基因的蛋白表達(dá)水平，并通過(guò)Kaplan-Meier及Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析RIP3在結(jié)直腸癌中的表達(dá)差異與患者術(shù)后生存率、復(fù)發(fā)率之間的關(guān)系。
　　3.通過(guò)構(gòu)建RIP3基因過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，體外轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細(xì)胞。研究RIP3過(guò)表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞的細(xì)胞增殖、平板克隆集落形成、侵襲與轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)凋亡等生物學(xué)功能的影響。探討過(guò)表達(dá)RIP3基因?qū)Y(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。
　　

3、結(jié)果:
　　1.Real-time PCR結(jié)果顯示腫瘤組織中RIP3 mRNA表達(dá)水平低于正常組織2倍以上的達(dá)60.5％（23/38）。Western blot結(jié)果提示RIP3蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)低于配對(duì)正常組織中的表達(dá)。
　　2.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示RIP3表達(dá)率與患者腫瘤大小(P=0.027),腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.016)與AJCC分期(P=0.002)高度相關(guān)。Kaplan-Meier和Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型顯示R

4、IP3陰性表達(dá)病例的總生存率及無(wú)病生存率均明顯低于RIP3陽(yáng)性表達(dá)病例(P=0.004, P=0.015)。
　　3.體外細(xì)胞功能試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞過(guò)表達(dá)RIP3能顯著抑制細(xì)胞的增殖、集落形成、侵襲與轉(zhuǎn)移能力，通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)RIP3過(guò)表達(dá)細(xì)胞凋亡比例明顯升高。
　　結(jié)論:
　　1.結(jié)直腸癌中RIP3 mRNA及蛋白表達(dá)水平較正常配對(duì)黏膜上皮組織表達(dá)顯著降低。
　　2.RIP3表達(dá)降低與一