RIP1和RIP3在糖尿病腎病大鼠腎組織中的表達及意義.pdf

1、目的：
　　構建糖尿病腎病大鼠模型，探討壞死性凋亡信號途徑標志物RIP1和RIP3在該病大鼠模型腎組織中的表達及意義。
　　方法：
　　雄性成年SD大鼠，標準化喂養(yǎng)。實驗分為糖尿病腎病模型組(DN)和正常對照組(NC)，每組2、4、8、12、16周5個觀察點，每個時點6只大鼠，DN組采用鏈脲菌素（STZ）腹腔注射造模，50只SD大鼠注射STZ，2周時成模40只，未成模7只,死亡3只。處死前采取血液、尿液標本，檢測血糖、

2、血清肌酐、血清尿素和24小時尿蛋白；腎臟石蠟切片作蘇木素-伊紅(Hematoxylin-eosin,HE)和過碘酸-雪夫(Periodic Acid-Schiff,PAS)染色普通病理；運用免疫組化、免疫熒光和蛋白印跡（Western Blot,WB）測定腎臟組織中受體交互作用蛋白1(Receptorinteraction protein1,RIP1)、受體交互作用蛋白3(Receptorinteraction protein3,RIP

3、3)及核轉錄因子Kappa B(Nuclearfactor-kappa B,NF-κB)的蛋白表達，實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-Time polymerase chain reaction,RT-PCR)方法測定腎組織的RIP1、RIP3及NF-κBmRNA相對表達量。分析各指標之間的相關性。
　　結果：
　　1.血、尿指標：1)血糖：①DN組不同時間點血糖比NC組明顯增加(P＜0.01)。②DN組血糖隨時間不斷增加

4、，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。2)24小時尿蛋白：①DN組不同時間點尿蛋白比NC組明顯增加(P＜0.01)。②DN組24小時尿蛋白定量隨時間不斷增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。3)血清肌酐及尿素：①DN組不同時間點血清肌酐及尿素比NC組明顯增加(P＜0.01)。②DN組血清肌酐及尿素氮差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.腎臟病理：①DN組大鼠腎臟發(fā)白、腫大，可見不同程度的腎小球肥大、細胞數增多

5、、系膜基質增多、部分腎小管擴張及空泡樣變性。②DN組不同時間點腎重指數比NC組明顯增加(P＜0.01)。③DN組腎重指數隨時間不斷增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01或P<0.05)。
　　3.免疫組化及熒光：①RIP1、RIP3及NF-κB主要表達于腎小球中；②DN組RIP1、RIP3及NF-κB不同時間點比NC組均明顯增加(P＜0.01)。③DN組以上三個指標表達量不同時間點比較，均為2W與4W相比差異無統(tǒng)計學意義，8W、12

6、W、16W顯著高2W、4W，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，8W與12W相比差異無統(tǒng)計學意義，16W顯著高于8W、12W，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01或 P<0.05)。④DN組NF-κB的蛋白表達量與RIP1、RIP3呈正相關性；RIP1、RIP3與尿蛋白、腎重指數、血清肌酐及尿素均呈正相關。
　　4.蛋白印跡：①DN組不同時間點RIP1、RIP3及NF-κB蛋白表達均高于NC組(P＜0.01)。②DN組以上三個指標表達量不

7、同時間點比較，均為2W與4W相比差異無統(tǒng)計學意義，8W、12W、16W顯著高于2W、4W，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，12W與8W相比差異無統(tǒng)計學意義，16W顯著高于8W和12W，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。③DN組NF-κB與RIP1、RIP3呈正相關性；RIP1、RIP3與尿蛋白、腎重指數、肌酐和尿素均呈正相關。
　　5.Real-Time PCR：①DN組不同時間點RIP1、RIP3及NF-κB mRNA表達均高

8、于NC組(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。②DN組以上三個指標表達量不同時間點比較，均為2W與4W差異無統(tǒng)計學意義，8W、12W、16W顯著高于2W、4W，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，12W與8W相比差異無統(tǒng)計學意義，16W顯著高于8W和12W，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。③DN組NF-κB與RIP1、RIP3呈正相關性；RIP1、RIP3與尿蛋白、腎重指數均呈正相關，RIP3與肌酐和尿素呈正相關，RIP1