microRNA-374a靶向CCND1失活PI3K-AKT通路抑制結腸癌的發(fā)展.pdf

1、結腸癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年升高的趨勢，目前對結腸癌具體發(fā)病機制仍有很多尚待明確的地方。
　　microRNA-374a(miR-374a)在不同腫瘤中發(fā)揮不同的作用，如在乳腺癌中miR-374a可促進EMT的發(fā)生，在胃癌中促進細胞增殖，在鼻咽癌中卻可抑制細胞增殖、轉移，增加細胞對順鉑的敏感性，而miR-374a在結腸癌中的作用有待我們去研究。
　　目的:
　　1.體內外功能實驗研究miR-374a在結腸

2、癌中的作用;
　　2.探究miR-374a在結腸癌中發(fā)揮作用的機制;
　　3.找到miR-374a在結腸癌中作用的靶基因及miR-374a如何通過靶基因調控相關通路;
　　4.分析miR-374a和靶基因在結腸癌組織中表達的相關性及對預后的影響。
　　方法:
　　1.體內外功能實驗研究miR-374a在結腸癌中的作用
　　(1)在HCT116和SW620中構建穩(wěn)定過表達miR-374a的細胞株;

3、>　　(2)體外實驗驗證miR-374a對細胞增殖、侵襲和遷移的影響;
　　(3)裸鼠皮下成瘤和肝包膜轉移模型驗證miR-374a對細胞增殖和肝內轉移能力的作用，并用免疫組化檢測肝內腫瘤的EMT相關因子;
　　(4)轉染miR-374a inhibitors進行功能回復實驗。
　　2.探究miR-374a在結腸癌中發(fā)揮作用的機制:Western Blot檢測增殖和EMT相關蛋白表達改變并找到相關通路。
　　3.找

4、到miR-374a在結腸癌中作用的靶基因及miR-374a如何通過靶基因調控相關通路
　　(1)生物學軟件預測miR-374a的靶基因并進行雙熒光素酶報告驗證;
　　(2) Western Blot檢測干擾靶基因后周期、EMT蛋白表達及相關通路的改變，功能實驗檢測干擾靶基因對細胞功能的影響。
　　(3) Western Blot檢測重新表達靶基因后周期、EMT蛋白表達及相關通路的改變，功能實驗檢測重新表達靶基因對細胞功

5、能的影響。
　　4.分析miR-374a和靶基因在結腸癌組織中表達的相關性及對預后的影響
　　(1)免疫組化觀察miR-374a和靶基因在結腸癌組織表達定位和表達量差異;
　　(2)結合miR-374a和靶基因的表達分析兩者相關性及對預后的影響。
　　結果:
　　1.miR-374a在體內外均抑制結腸癌細胞增殖、侵襲、遷移和肝內轉移能力;
　　2.miR-374a抑制PI3K/AKT通路及下游周期、E