PI3K-AKt信號通路與正畸牙移動關系的研究.pdf

1、目的：
　　 建立動物模型，實時熒光定量PCR、Western免疫印跡分析方法，檢測P13K、AKt在正畸牙移動牙周組織改建過程中的表達及變化，探討正畸力作用下兔牙周組織中P13K/AKt信號通路在牙周組織改建過程中的作用。
　　 方法：
　　 1、建立動物模型
　　 選用24只日本大耳白兔（體重2.0±0.2kg），建立正畸牙移動的動物模型，按照3天、5天、7天、14天隨機分組，每組6只。上頜右側(cè)戴矯治

2、器為實驗組，分別在切牙與磨牙的近頸端纏繞雙股結(jié)扎絲，然后在切牙與磨牙間放置鎳鈦螺簧，力值80g，使磨牙近中移動。上頜左側(cè)未戴矯治器為對照組。實驗動物分別于3、5、7、14天處死。
　　 2、RQ-PCR
　　 按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒使用說明操作，選用oligndT作引物合成第一鏈cDNA，RQ-PCR檢測正畸力作用下P13K、AKt在牙周組織中的表達及變化。所有的產(chǎn)物，在ABI Prism 7500HT 序列檢測系統(tǒng)中運行。3次

3、獨立樣本經(jīng)過3次獨立實驗后得到的數(shù)據(jù)用公式RQ=2-△△ct 進行分析。
　　 3、Wrestern免疫印跡分析
　　 吸取上清，棄沉淀，考馬斯亮藍法測定樣品中蛋白濃度。上清用8％SDS-PAGE分離然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，經(jīng)2h50V的轉(zhuǎn)印后 TTBS洗膜5 min×3次。用含5％BSA的TTBS封閉，4℃過夜，再與抗P13K抗體，抗AKt抗體室溫孵育2h，與相應的HRP標記的羊抗兔二抗（1:5000）室溫孵育1 h，

4、ECL系統(tǒng)顯影。
　　 4、統(tǒng)計學分析
　　 應用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件對戴矯治器組與未戴矯治器組進行配對t檢驗，P<0.05，有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、RQ-PCR
　　 與對照組比較，加力3天后牙周組織中 P13K、AKt mRNA表達增加，7天明顯增加，隨后下降。3天、5天、7天、14天各時段與對照組比較均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其中7天差異顯著（P<0.01）。

5、r>　　 2、Western免疫印跡分析
　　 與RQ-PCR結(jié)果相一致。正畸力作用下P13K、AKt在兔牙周組織中的蛋白表達增加，7天尤為顯著，隨后下降。3天、5天、7天、14天各時段與對照組比較均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其中7天差異顯著（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1、正畸力作用下兔牙周組織中P13K、AKt的表達增加。
　　 2、P13K/AKt信號通路參與正畸牙移動過程中的牙周組