暹羅鱷（Crocodylus siamensis）組織細(xì)胞中抗菌活性物質(zhì)的提取與效果研究.pdf

1、生物源性抗菌活性物質(zhì)在生物體免疫機(jī)制中發(fā)揮著重要的作用，它們的分離鑒定和功能研究也是近年來新一代抗菌劑研發(fā)的熱點(diǎn)。鱷魚作為爬行動(dòng)物的代表，具有生命力旺盛，抗感染力強(qiáng)的特點(diǎn)。雖然科學(xué)家已經(jīng)對(duì)種類繁多的爬行動(dòng)物進(jìn)行了生物源性抗菌活性物質(zhì)的研究，但是對(duì)于鱷魚的相關(guān)研究卻鮮見報(bào)道。本文針對(duì)此研究空白，在提取得到暹羅鱷外周血、腸道、肝臟、脾臟和腎臟組織細(xì)胞抗菌活性物質(zhì)的基礎(chǔ)上，對(duì)組織細(xì)胞提取物的體外抗菌活性以及外周血白細(xì)胞提取物在小鼠體內(nèi)抗海豚鏈

2、球菌感染的效果進(jìn)行了初步探討，進(jìn)而研究了外周血白細(xì)胞提取物的部分理化特性。本論文包括4個(gè)部分： 1、暹羅鱷組織細(xì)胞抗菌活性物質(zhì)的提取及組織分布 本實(shí)驗(yàn)采用改良乙酸提取法、硫酸銨提取法及丙酮甲醛混合液提取法分別從成年暹羅鱷的外周血、腸道、肝臟、脾臟和腎臟組織中提取抗菌活性物質(zhì)，初步對(duì)比了3種提取方法的提取效率以及抗菌活性物質(zhì)的組織分布。結(jié)果顯示：①改良乙酸法從暹羅鱷各組織細(xì)胞中提取的物質(zhì)的其抗菌作用要強(qiáng)于(或等于)硫酸銨提

3、取法；而丙酮甲醛混合液法沒有提取到相應(yīng)的抗菌活性物質(zhì)。其中，改良乙酸法提取外周血得到抗菌活性物質(zhì)的效率最高，在提取物蛋白濃度為0.265g/mL時(shí)抑菌圈直徑能達(dá)到9.1 mm。②腸道、外周血和肝臟提取物的抗菌效果明顯，而脾臟和腎臟組織的提取物未表現(xiàn)出抗菌活性。由此可見，抗菌物質(zhì)在腸道、外周血以及肝臟組織中含量較多，在脾臟和腎臟中沒有抗菌成分或者含量較少。 2、暹羅鱷外周血白細(xì)胞提取物的體外抗菌效果 本實(shí)驗(yàn)用改良乙酸法提取

4、成年暹羅鱷外周血白細(xì)胞的抗菌活性物質(zhì)，測(cè)定其對(duì)10種細(xì)菌的體外抗菌活性。結(jié)果表明暹羅鱷外周血白細(xì)胞提取物對(duì)埃希氏大腸桿菌(Eschenrichia coil)、海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)、多殺性巴斯德菌(Pasteurella pneumotropica)、溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)、金黃色葡萄球菌(StaPHylococcus aureus)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydro

5、PHila)、副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)、溶藻弧菌(Hbrio alginolyticus)、創(chuàng)傷弧菌(Fibrio vulnificus)、霍亂弧菌(Vibrio cholerae)等10種細(xì)菌均有一定的抗菌效力；其中，對(duì)海豚鏈球菌的抗菌效力最強(qiáng)，抑菌圈達(dá)22.1 mm；對(duì)大腸桿菌的抗菌效力次之，抑菌圈達(dá)21.7 mm；對(duì)霍亂弧菌的抗菌效力較弱，抑菌圈為7 mm。此外，還比較了暹羅鱷外周血白細(xì)胞和密西西

6、比紅耳龜、花田雞外周血白細(xì)胞提取物的抗菌效力的強(qiáng)弱，發(fā)現(xiàn)前者對(duì)于實(shí)驗(yàn)所用10種細(xì)菌的抗菌效力明顯強(qiáng)于后兩者：其中，對(duì)鏈球菌的抗菌效力，暹羅鱷外周血白細(xì)胞提取物最強(qiáng)，抑菌圈達(dá)21.3 mm，密西西比紅耳龜外周血白細(xì)胞提取物次之，抑菌圈為5.3 mm，花田雞白細(xì)胞提取物最弱，抑菌圈為0.67mm。 3、暹羅鱷外周血白細(xì)胞提取物抗海豚鏈球菌感染效果 本實(shí)驗(yàn)通過改良乙酸提取法從成年暹羅鱷外周血白細(xì)胞中獲得提取物，并將此提取物以3

7、種不同的方式注射小鼠，測(cè)定其在小鼠體內(nèi)抗御海豚鏈球菌感染的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，海豚鏈球菌以腹腔注射感染小鼠，小鼠表現(xiàn)出明顯病理癥狀，用不同濃度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/mL)的提取物腹腔注射小鼠，可使小鼠分別獲得77.8％、55.6％、44.4％的相對(duì)保護(hù)率；海豚鏈球菌與不同濃度(2.2×103、2.2×102、2.2×10μg/mL)的提取物在體外等體積混合，將此混合物腹腔注射小鼠，可使小鼠分別獲得55.6

8、％、88.9％、77.8％的相對(duì)保護(hù)率；海豚鏈球菌以肌肉注射小鼠左腿，同時(shí)以不同濃度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/mL)的提取物以肌肉注射小鼠右腿，可使小鼠分別獲得77.8％、66.7％、44.4％的相對(duì)保護(hù)率。 4、遏羅鱷外周血白細(xì)胞提取物的理化性質(zhì)本實(shí)驗(yàn) 研究了成年暹羅鱷外周血白細(xì)胞提取物的部分理化性質(zhì)及抗菌動(dòng)力學(xué)。理化因子研究表明，抗菌成分對(duì)熱穩(wěn)定、對(duì)EDTA敏感、對(duì)氯仿穩(wěn)定；動(dòng)力學(xué)研究表明