增殖的組織細胞中糖代謝增強.pdf

1、目的：糖代謝是生物體內(nèi)普遍存在的能量代謝過程。在血管損傷和惡性腫瘤組織中的糖代謝活躍，以滿足細胞增殖的需要。目前，有關(guān)糖代謝異常與增殖性疾病的關(guān)系仍尚未完全清晰。本文通過觀察小鼠頸總動脈內(nèi)皮損傷模型、惡性腫瘤及腫瘤細胞系中糖代謝途徑關(guān)鍵酶的活性變化，探討糖代謝與細胞增殖的關(guān)系，為理解增殖細胞的糖代謝規(guī)律提供實驗依據(jù)。
　　方法：⑴隨機選取C57BL/6小鼠，雄性，8~12周，13只。異氟烷吸入式麻醉，行單側(cè)頸總動脈結(jié)扎，設(shè)為血管損

2、傷組；對側(cè)頸總動脈不作處理設(shè)為假手術(shù)組。血管損傷組和假手術(shù)組分別于結(jié)扎術(shù)后14天，心臟灌流后取小鼠頸總動脈并將血管分為兩部分，一部分勻漿，提取組織蛋白，分別用Western blot方法和己糖激酶活性測定試劑盒檢測血管壁中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）的表達和己糖激酶（hexokinase，HK）活性；另一部分取材后，進行脫水、石蠟包埋、切片、免疫組織化學(xué)染色法檢測

3、糖酵解途徑中最后一個關(guān)鍵酶丙酮酸激酶-2（pyruvate kinase-2，PKM2）的表達。⑵收集2014年7月-2015年11月期間河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外二科結(jié)直腸癌的標(biāo)本30例，以結(jié)直腸癌組織標(biāo)本為實驗組，距腫瘤10 cm以外的正常腸粘膜組織為對照組。標(biāo)本分為兩份，一份放入-80℃冰箱中凍存，隨后用Western blot方法檢測標(biāo)本中G6PD、PKM2的表達，用己糖激酶活性測定試劑盒檢測HK活性；另一份放入4％的多聚甲醛組織固

4、定液中固定，隨后進行脫水、石蠟包埋、切片及免疫組化染色檢測G6PD及PKM2的表達。⑶無菌環(huán)境下培養(yǎng)人結(jié)腸癌腫瘤細胞系HCT116細胞和人正常結(jié)腸粘膜上皮細胞系FHC細胞，用Western blot方法檢測兩種細胞中G6PD和PKM2的表達，用己糖激酶活性測定試劑盒檢測HK活性。
　　結(jié)果：①C57BL/6小鼠頸總動脈結(jié)扎損傷后第14天，Western blot結(jié)果顯示，損傷側(cè)G6PD的表達明顯高于對照側(cè)（P<0.05）；并且HK

5、活性變化趨勢與G6PD相似，損傷側(cè)HK的活性明顯高于對照（P<0.05）；免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，損傷側(cè)PKM2的陽性顆粒數(shù)明顯升高（P<0.05）。②Western blot結(jié)果顯示，30例患者腫瘤組織中G6PD和PKM2的表達水平高于癌旁正常組織(P<0.05)。腫瘤組織中HK活性水平高于癌旁正常組織(P<0.05)；免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，腫瘤組織中G6PD和PKM2的陽性顆粒數(shù)高于癌旁正常組織(P<0.05)。③Western bl