長(zhǎng)春花愈傷組織細(xì)胞突變的研究.pdf

1、長(zhǎng)春花不僅是一種很有觀賞價(jià)值的花卉,而且還是一種名貴的藥用植物,中藥可全株入藥.含有100多種吲哚生物堿,多數(shù)具有生物活性,具有很高的藥用價(jià)值.如阿瑪堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春質(zhì)堿等.其中,長(zhǎng)春質(zhì)堿作為抗癌藥物的合成前體,近年來(lái)受到人們的高度重視.目前,細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)被公認(rèn)為是生產(chǎn)長(zhǎng)春花藥用成分最有效的途徑.該文以長(zhǎng)春花愈傷組織為實(shí)驗(yàn)材料,以長(zhǎng)春質(zhì)堿和阿瑪堿為主要研究對(duì)象,并采用RP-HPLC法對(duì)長(zhǎng)春質(zhì)堿和阿瑪堿進(jìn)行分析測(cè)定;圍繞提高其藥用成分含量

2、,生物鮮重產(chǎn)量及篩選穩(wěn)定的細(xì)胞品系為中心,重點(diǎn)開展了EMS誘變、秋水仙堿誘變、吲哚生物堿的增產(chǎn)處理、積累規(guī)律分析等方面的研究.長(zhǎng)春花二倍體愈傷組織和細(xì)胞的生長(zhǎng)周期均可分為三個(gè)階段:適應(yīng)階段、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段和穩(wěn)定階段.適應(yīng)階段的愈傷組織細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,吲哚生物堿含量也無(wú)明顯變化;對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段以愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖為主;進(jìn)入穩(wěn)定階段后,吲哚生物堿迅速積累.長(zhǎng)春花懸浮培養(yǎng)細(xì)胞比愈傷組織生長(zhǎng)周期短,生物產(chǎn)量高.EMS誘變細(xì)胞系研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)春花愈傷

3、細(xì)胞對(duì)EMS非常敏感,4小時(shí)處理,二倍體長(zhǎng)春花愈傷細(xì)胞發(fā)生非整數(shù)倍變化,染色體由原來(lái)的16對(duì)變成96對(duì)左右;生理研究表明,誘變后的變異細(xì)胞系不僅生物產(chǎn)量高而且吲哚生物堿含量也高,阿瑪堿含量提高了約1倍,間隔幾代的生理性狀也比較穩(wěn)定.用秋水仙堿處理長(zhǎng)春花愈傷細(xì)胞得到的四倍體細(xì)胞系優(yōu)于對(duì)照細(xì)胞系,變異后的細(xì)胞系生物鮮重有顯著的增加,最高生物產(chǎn)量可達(dá)33.0g/瓶,為對(duì)照的3倍,并且在吲哚生物總堿變化不大的前提下,目的藥用成分長(zhǎng)春質(zhì)堿含量提高