長春花活性成分時空動態(tài)及其抗氧化抗炎活性研究.pdf

1、長春花是最重要的藥用植物之一，主要是由于其含有抗癌生物堿。本文確定了一種新型環(huán)保，同時從長春花葉片中提取五種吲哚生物堿文多靈，長春質(zhì)堿，長春新堿，長春堿和脫水長春堿的酶輔助負(fù)壓空化提取方法。通過檢測溫室栽培長春花不同生長月份各器官的生物量動態(tài)和五種吲哚生物堿的含量動態(tài)，確定了其最佳采收期。同時研究了長春花葉片提取物的抗氧化潛力及其對脂多糖誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7分泌炎癥因子的調(diào)節(jié)作用。主要結(jié)論如下:
　　1.長春花生物

2、堿酶輔助提取工藝
　　以五種主要的吲哚生物堿為檢測指標(biāo)，利用響應(yīng)面優(yōu)化方法，選擇四個因素的最佳水平（濃度、pH值、溫度、時間）進行優(yōu)化實驗。
　　最佳條件是:0.61％(w/w干物質(zhì))的果膠酶和0.61％β-葡萄糖苷酶的組合，酶溶液pH值為4.73，提取溫度為35.87℃，提取時間8.62小時。在酶輔助負(fù)壓空化提取方法的最佳條件下，五種吲哚生物堿文多靈、長春質(zhì)堿、長春堿、長春新堿和脫水長春堿提取率達到4.940±0.215，

3、6.283±0.307，0.049±0.002，0.066±0.003和0.038±0.001mg·g-1，與正常負(fù)壓空化提取方法相比分別增加了28％，34％，33％，27％和37％。
　　2.長春花活性成分時空動態(tài)變化
　　以溫室栽培長春花為實驗材料，采用高效液相色譜法研究長春花不同生長月份（當(dāng)年4月到次年1月）、各器官（根、莖和葉）的五種生物堿含量動態(tài)，結(jié)果如下:
　　所檢測的五種生物堿含量受季節(jié)和組織部位的影響，

4、葉片中文多靈和長春質(zhì)堿含量最高，莖中所有生物堿含量均較低，根中長春堿含量較高，僅次于葉;8月文多靈和長春質(zhì)堿含量最高，9月長春新堿含量最高;生物堿總量8月最高，根、莖和葉分別為5.61mg·g-1、1.90mg·g-1和8.63mg·g-1。結(jié)論是8月為長春花的最佳采收期。
　　3.長春花中活性生物堿抗氧化活性
　　研究了了長春花提取物體外抗氧化活性。采用分光光度法，測定長春花提取物的總抗氧化能力和1，1-二苯基-2-苦肼基

5、自由基(DPPH)的清除能力，通過多元線性回歸分析，考察長春花提取物含量及其體外抗氧化活性的相關(guān)性。
　　結(jié)果表明長春花提取物總抗氧化能力和DPPH自由基清除作用均較好，根的IC50值為153μg·mL-1，莖的IC50值為476μg·mL-1，葉片的IC50值為447μg·mL-1，長春花不同組織部位提取物對DPPH自由基清除能力:根的提取物＞葉片的提取物＞莖的提取物。在供試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對自由基的清除效率與長春花提取物濃度有一

6、定量效關(guān)系。3種提取物對ABTS自由基清除率均超過了80％，根的清除率最高可達96.11％。說明長春花提取物具有顯著的體外抗氧化作用。
　　4.長春花初步抗炎活性與機理
　　初步研究了長春花提取物對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生IL-6和TNF-α的作用，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測0.012，0.06和0.3 mg·mL-1低、中、高3個濃度長春花提取物對終濃度