中藥植物金果欖抗菌活性及活性物質(zhì)研究.pdf

1、本文以采自廣西北部及廣西東南地區(qū)的63個(gè)科的共104種植物為篩選對(duì)象,植物材料用甲醇冷浸提取后,測(cè)定植物提取物對(duì)柑橘炭疽病菌的抗菌活性。在活性篩選基礎(chǔ)上,選擇對(duì)供試菌具有較高抑制活性的金果欖Tinospora capoillpes Gag-nep,采用活性追蹤法對(duì)其抗菌活性成分進(jìn)行分離,并鑒定出活性成分的結(jié)構(gòu),初步研究了金果欖的抗菌機(jī)理。以柑橘炭疽病菌Colletotrichum gloeosporidides(Penz.) Sacc為

2、供試菌,采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了104種植物共116種植物提取物的抑菌活性。結(jié)果表明,在10mg/mL的質(zhì)量濃度下,金果欖塊根、廣西地不容塊根和枝葉、金線吊烏龜塊根、石菖蒲花、黃連根莖6種提取物對(duì)柑橘炭疽病菌的抑制率達(dá)100.00%；彎蕊開口箭塊莖、紫莖澤蘭葉、云木香根莖3種植物提取物對(duì)柑橘炭疽病菌的抑制率在80.00%以上,分別為88.33%,87.98%,81.24%；其它大部分植物提取物對(duì)供試菌表現(xiàn)出一定的抗菌活性。進(jìn)一步測(cè)定了扁

3、骨風(fēng)藤、紫莖澤蘭葉、彎蕊開口箭塊莖、金果欖塊根、廣西地不容塊根、金線吊烏龜塊根和黃連根莖對(duì)柑橘炭疽病菌的毒力。7種提取物對(duì)柑橘炭疽病菌的有效中濃度(EC50值)分別為0.7101mg/mL、2.2073mg/mL、0.8391mg/mL、0.1528mg/mL、0.8872mg/mL、3.0666mg/mL、0.1654mg/mL。其中,金果欖塊根甲醇提取物對(duì)柑橘炭疽病菌的毒力最高,金線吊烏龜塊根甲醇提取物對(duì)柑橘炭疽病菌的毒力最低,其最

4、高與最低的相對(duì)毒力比值約為20倍。按照生物堿的分離程序?qū)⒔鸸麢靿K根提取物分成非生物堿、弱堿性生物堿、中強(qiáng)堿性生物堿、正丁醇層生物堿和水層5部分,經(jīng)活性測(cè)定,表明其抗菌活性成分主要存在于弱堿性生物堿層、中強(qiáng)堿性生物堿層。通過硅膠柱層析、葡聚糖凝膠柱層析和薄層層析,并以柑橘炭疽病菌為供試菌進(jìn)行活性追蹤,從金果欖提取物中分離獲得2個(gè)活性化合物,經(jīng)核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(MS)解析,分別被鑒定為巴馬亭和藥根堿。采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了巴馬亭對(duì)

5、柑橘炭疽病菌的毒力,同時(shí)測(cè)定了巴馬亭對(duì)另外10種植物病原真菌的抑菌活性并進(jìn)一步測(cè)定其對(duì)其中6種植物病原真菌的毒力,結(jié)果表明,巴馬亭對(duì)柑橘炭疽病菌的EC50為0.0348mg/mL、對(duì)玉米炭疽病菌和梨銹病菌的毒力分別為0.1302mg/mL、0.1356mg/mL；抗菌活性高于對(duì)其他供試菌種的抗菌活性。測(cè)定了巴馬亭對(duì)12種動(dòng)物致病細(xì)菌的最低抑制濃度(MIC),結(jié)果表明巴馬亭對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制活性最強(qiáng),其最小抑制濃度為0.1mg/mL,對(duì)

6、金黃色葡萄球菌、溶壁微球菌和傷寒沙門氏桿菌的最小抑制濃度均為0.2mg/mL,對(duì)其余5種供試細(xì)菌的最小抑制濃度在0.3mg/mL~0.8mg/mL之間。對(duì)藤黃微球菌、銅綠假單胞菌和痢疾志賀氏菌的最小抑制濃度>；1mg/mL。測(cè)定了藥根堿對(duì)柑橘炭疽病菌的毒力,同時(shí)測(cè)定了藥根堿對(duì)另外10種植物病原真菌的抑菌活性并進(jìn)一步測(cè)定其對(duì)其中7種植物病源真菌的毒力。結(jié)果表明,藥根堿對(duì)柑橘炭疽病菌的EC50為0.0240mg/mL、對(duì)玉米炭疽病菌和梨

7、銹病菌的毒力分別為0.1158mg/mL、0.1097mg/mL；抗菌活性高于對(duì)其他供試菌種的抗菌活性。測(cè)定了藥根堿對(duì)12種動(dòng)物致病細(xì)菌的最低抑制濃度(MIC),結(jié)果表明藥根堿對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制活性最強(qiáng),其最小抑制濃度為0.1mg/mL,對(duì)蠟狀芽孢桿菌、溶壁微球菌、普通變形桿菌和傷寒沙門氏桿菌的最小抑制濃度均為0.2mg/mL,對(duì)其余4種供試細(xì)菌的最小抑制濃度在0.3mg/mL~0.6mg/mL之間。對(duì)藤黃微球菌、銅綠假單胞菌和痢疾志