Mindin在急性腸炎中表達(dá)上調(diào)并通過提高NF-κB家族蛋白轉(zhuǎn)錄活性促進(jìn)炎癥發(fā)生.pdf

1、炎癥性腸病(IBD)的發(fā)生，被認(rèn)為是遺傳、環(huán)境和黏膜免疫三方面因素共同作用的結(jié)果，而腸黏膜異常的免疫應(yīng)答又是發(fā)病的關(guān)鍵因素之一。在炎癥局部，炎性細(xì)胞的招募和激活依賴各種細(xì)胞膜受體及整合素與細(xì)胞基質(zhì)(ECM)間的相互作用。細(xì)胞外基質(zhì)蛋白Mindin是Mindin/F-spondin家族成員，在小鼠炎癥模型中，有多項(xiàng)研究表明Mindin在免疫應(yīng)答過程中扮演重要角色，但對于其在炎癥中的功能和調(diào)控機(jī)制研究較少。故本課題擬探索腸炎中Mindin的

2、表達(dá)水平及其在炎癥中的信號調(diào)控機(jī)制。
　　本課題研究中，我們給予C57BL/6小鼠3％的DSS溶液構(gòu)建急性腸炎模型，提取模型小鼠腸道組織mRNA，通過實(shí)時(shí)定量PCR發(fā)現(xiàn)Mindin及NF-κBp65 mRNA表達(dá)同對照組相比呈明顯上調(diào)。為了明確腸炎中NF-κB p65的表達(dá)上調(diào)是否是由Mindin誘導(dǎo)所引起，我們構(gòu)建了Mindin過表達(dá)的質(zhì)粒及pNF-κB-luc質(zhì)粒，應(yīng)用雙熒光素酶檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示NF-κB p65啟動

3、子的轉(zhuǎn)錄活性在Mindin過表達(dá)及CpG-ODG的刺激下明顯增加。為了更深一步探索Mindin在炎癥中的調(diào)控機(jī)制，我們通過生物信息學(xué)預(yù)測及免疫共沉淀等方法初步證實(shí)CR3(CD11b/CD18)為Mindin的膜結(jié)合蛋白，并確定結(jié)合部位為Mindin的FS結(jié)構(gòu)域，進(jìn)而，我們利用Mindin重組蛋白刺激RAW246.7和CMT93細(xì)胞，通過核漿分離免疫印跡證實(shí)Mindin可促進(jìn)NF-κB p50的核轉(zhuǎn)位。最后我們通過分離小鼠腹腔單核細(xì)胞，在

4、Mindin蛋白的刺激下行熒光微球吞噬試驗(yàn)，結(jié)果顯示在Mindin蛋白的刺激下小鼠單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能明顯增強(qiáng)。
　　綜上，我們得出結(jié)論:Mindin mRNA在腸炎中表達(dá)上調(diào)，且可通過TLR-9介導(dǎo)的方式上調(diào)NF-κB p65的轉(zhuǎn)錄活性;此外Mindin可與CR3(CD11b/CD18)共結(jié)合，結(jié)合部位為Mindin的FS結(jié)構(gòu)域，Mindin可能通過與CR3的相互作用促進(jìn)NF-κB p50的核轉(zhuǎn)位，進(jìn)而激活炎性細(xì)胞，促進(jìn)炎癥。