干擾素調控磷脂爬行酶1表達的分子機制研究.pdf

1、磷脂爬行酶1(phospholipid scramblase 1，PLSCRl)屬于鈣離子結合的II型膜蛋白。但是，非棕櫚?；腜LSCRl也可進入細胞核并結合基因組DNA。本課題組最近的研究表明分化誘導劑全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)和氟波酯(phorbol12-myristate 13-acetate，PMA)通過活化蛋白激酶C6(protein kinase Cδ，PKCδ)顯著上調PLS

2、CRl的表達。另一方面，有報道顯示干擾素(interferon，IFN)也可增加PLSCRl的表達和活化PKCδ。但是，有關IFN和PKCδ上調PLSCRl表達的確切機制尚未闡明。為此，本文試圖以IFNα2a為研究對象，開展PLSCRl的表達調控機制研究，取得如下主要結果： (1)IFNα2a誘導STATl(Signal transducers and activators oftranscription 1)蛋白的727位

3、絲氨酸磷酸化，并上調PLSCRl在U937、HTl080等細胞中的表達。但是，IFNa2a誘導的PLSCRl表達并不發(fā)生在來源于HTl080細胞，但STATl缺陷的U3A細胞。在U3A細胞，野生型STATl的轉染表達完全恢復IFN．cx2a對PLSCRl表達的誘導效應，但727位絲氨酸突變型STATl(STATl-S727A)的轉染則無該效應。這些實驗表明，IFNa2a通過STATl上調PLSCRl的表達，其中STATl-Ser-727

4、的磷酸化是必需的。 (2)IFNa2a在活化STATl并上調PLSCRl表達的同時，也通過磷酸化的方式活化PKC-δ。進一步地，PKC8抑制劑rottlefin和顯性負突變型PKC-δ表達質粒(dominant negative PKCδ，DNδ)的轉染在抑制PKCδ活性的同時，也抑制IFN．-αt2a誘導的STATl-Ser-727磷酸化和PLSCRl表達，說明IFN-a2a通過活化PKC-δ激活STATl信號通路，進而上

5、調PLSCRl表達。 (3)為了了解PKC-δ激活STATl信號通路的分子機制，U937細胞經各種有絲分裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinases，MAPKs)抑制劑包括JNK(c-Jun N-Terminal Kinase)抑制劑SP600125、ERKl／2(extracellular-regulated kinase)抑制劑U0126和P38激酶抑制劑SB203580預處理。

6、結果發(fā)現(xiàn)，SP600125(但不是U0126和SB203580)顯著拮抗IFNa2a引起的STATl絲氨酸磷酸化和PLSCRl上調。相似的結果也見于轉染表達顯性負突變型JNK(DN-JNK)的細胞。這些實驗表明，JNK介導了IFNa2a誘導的STATl絲氨酸的磷酸化。 (4)特異性JNK抑制劑SB600125和過表達DN-JNK質粒在抑制JNK活性的同時，并不影響IFNa2a誘導的PKCδ磷酸化活化。相反，PKCδ抑制劑ro