miR-22調(diào)控Ⅰ型干擾素和炎癥因子表達(dá)的分子機(jī)制.pdf

1、miRNA通過堿基序列互補(bǔ)結(jié)合靶基因來降解靶基因mRNA或抑制其轉(zhuǎn)錄后翻譯，是調(diào)節(jié)基因表達(dá)的關(guān)鍵分子。近年來研究表明miRNA不僅廣泛參與細(xì)胞增殖分化、細(xì)胞凋亡、器官形成等生理進(jìn)程，還在天然免疫及病毒感染過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。病毒感染及天然免疫通路的激活會引起miRNA的表達(dá)發(fā)生變化，差異表達(dá)的miRNA進(jìn)而又能調(diào)控天然免疫反應(yīng)和病毒的感染。Poly(I∶C)是雙鏈RNA免疫刺激物，poly(I∶C)刺激細(xì)胞能夠被細(xì)胞的天然免疫受體

2、識別，誘導(dǎo)產(chǎn)生Ⅰ型干擾素和炎癥細(xì)胞因子。本研究旨在以miR-22為研究對象，探索poly(I∶C)和乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）刺激神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞過程中miR-22的表達(dá)情況，以及在此過程中miR-22調(diào)控Ⅰ型干擾素和炎癥因子表達(dá)的分子機(jī)制。主要研究內(nèi)容如下:
　　1.Poly(I:C)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)源性miR-22的上調(diào)表達(dá)Poly(I∶C)處理的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)和人神經(jīng)母

3、細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SYSY)，用熒光定量PCR檢測細(xì)胞中miR-22的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)miR-22的表達(dá)顯著上調(diào)，且呈時間和劑量的依賴性。
　　2.miR-22負(fù)調(diào)控poly(I∶C)誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素和炎癥因子的表達(dá)
　　U251細(xì)胞過表達(dá)miR-22能夠顯著的抑制poly(I∶C)誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素和炎癥因子的表達(dá)。相反，抑制內(nèi)源性的miR-22后，能夠顯著的促進(jìn)poly(I∶C)在U251細(xì)胞上誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素和炎癥因子的表

4、達(dá)。
　　3.miR-22靶向MAVS
　　通過軟件預(yù)測分析以及熒光素酶、熒光定量PCR、Western Blot等方法驗證，證實了MAVS（Mitochondrial antiviral-signaling protein，MAVS）是miR-22的一個直接靶標(biāo)。miR-22通過與MAVS基因的3'UTR結(jié)合，抑制細(xì)胞內(nèi)源性MAVS的表達(dá)。
　　4.miR-22通過靶向MAVS負(fù)調(diào)控poy(I∶C)誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素和

5、炎癥因子的表達(dá)
　　過表達(dá)MAVS質(zhì)?？梢曰謴?fù)miR-22對poly(I∶C)誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素和炎性因子的抑制作用。沉默MAVS后顯著的抑制poly(I∶C)誘導(dǎo)到的Ⅰ型干擾素和炎癥因子的表達(dá)，與過表達(dá)miR-22是一致的效果。此外，miR-22通過靶向MAVS抑制其下游轉(zhuǎn)錄因子IRF3和NF-κB的激活。證明miR-22通過靶向MAVS負(fù)調(diào)控poly(I∶C)誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素和炎癥因子的表達(dá)。
　　5.miR-22促進(jìn)JE

6、V在膠質(zhì)細(xì)胞中的復(fù)制
　　JEV感染U251細(xì)胞能夠誘導(dǎo)miR-22的上調(diào)表達(dá)，且呈時間和劑量的依賴性。而在U251細(xì)胞過表達(dá)miR-22則可以促進(jìn)JEV的增殖。相反，抑制內(nèi)源性miR-22后，會抑制JEV在U251細(xì)胞上的增殖。
　　本研究首次證明了miR-22在poly(I∶C)刺激細(xì)胞過程中的重要作用，鑒定了miR-22的一個新靶標(biāo)MAVS，揭示了miR-22調(diào)控Ⅰ型干擾素和炎癥因子表達(dá)的分子機(jī)制，為進(jìn)一步闡明病毒誘導(dǎo)