人lambda1和epsilon干擾素基因的克隆和在WI-38細(xì)胞中的表達(dá)及其活性比較.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：研究新型干擾素hIFN-λ1和hIFN-ε基因在WI-38細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)活性，并進(jìn)行對(duì)比分析。 方法：利用PCR法由原重組表達(dá)載體重新構(gòu)建His重組融合表達(dá)載體pcDNA3.1A-hIFN-λ1-His和pcDNA3.1A-hIFN-ε-His，脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染W(wǎng)I-38人胚肺細(xì)胞，G418篩選獲得轉(zhuǎn)基因細(xì)胞并經(jīng)PCR、RT-PCR和dot-ELISA鑒定。采用微量細(xì)胞病變抑制試驗(yàn)研究和比較rhIFN-λ1-His

2、和rhIFN-ε-His對(duì)HSV-Ⅰ、PolioⅤ和Ad3病毒的抗病毒活性；MTT法檢測(cè)其對(duì)SHG-44、MDA-MB-231和SMMC-7721腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；RT-PCR相對(duì)定量法檢測(cè)其誘導(dǎo)WI-38和SHG-44細(xì)胞產(chǎn)生人MxA抗病毒蛋白的活性。 結(jié)果：結(jié)果表明WI-38細(xì)胞中能夠穩(wěn)定表達(dá)rhIFN-λ1-His和rhIFN-ε-His蛋白，兩者均具有抗HSV-Ⅰ、PolioⅤ、Ad3病毒活性和抑制SHG-44、MDA

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